核酸提取原理及方法总结计划.pptVIP

SDS法原理 SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸； 提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀； 上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。 基因组DNA提取——SDS法 注：SDS法适用于大部分实验材料基因组DNA提取。如动物组织、细胞、全血、细菌、酵母等。 　SDS提取缓冲液的配方 基因组DNA提取——SDS法 　组份 Tris-HCl （pH 8.0） EDTA （pH 8.0 ） 　NaCl SDS 　终浓度 50 mM 20 mM 0.4 M 2% Tris-HCl（pH8.0）：提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； EDTA：螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； NaCl：提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中。 基因组DNA提取——SDS法 SDS法实验流程（以动物组织为例） 动物组织 抽提 酒精沉淀 液氮研磨 或匀浆 上层溶液 细胞裂解 DNA溶液 干燥溶解 离心洗涤 基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳检测 小鼠gDNA电泳图 琼脂糖凝胶电泳： 以琼脂糖凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。 基因组D