牛结核病外周抗凝血培养所需材料、夹心ELISA所需试剂和材料、检测所需仪器、所用试剂的配制.docxVIP

附 录 A （资料性） 外周抗凝血培养所需材料 A.1 肝素锂或肝素钠真空抗凝管； A.2 5 mL或10 mL动物采血器； A.3 无菌48孔细胞培养板； A.4 牛型PPD溶液（2.5 mL/瓶）； A.5 禽型PPD溶液（2.5 mL/瓶）； A.6 100 μL、1000 μL枪头； A.7 用于贮存血浆的1.5 mL离心管； A.8 96孔板架。 附 录 B （资料性） 夹心ELISA所需试剂和材料 B.1 酶标板（包被牛γ-干扰素单克隆抗体，含0.1% ProClin 300）； B.2 牛γ-干扰素阳性对照冻干粉（含0.1% ProClin 300）； B.3 牛γ-干扰素阴性对照冻干粉（含0.1% ProClin 300）； B.4 样品稀释液（血浆稀释缓冲液，含0.1% ProClin 300）； B.5 PBST洗涤液（20×）（含0.1% ProClin 300）； B.6 酶标抗体（含0.1% ProClin 300）； B.7 酶标抗体稀释液（含0.01%的硫柳汞）； B.8 底物显色液（TMB（3,3,5,5-四甲基联苯胺）溶液）； B.9 终止液（0.5M H2SO4）； B.10 灭菌纯水（用于溶解阳性对照、阴性对照冻干粉）； B.11 蒸馏水（用于稀释洗液）； B.12 酶联免疫吸附试验所需的试剂、反应槽、封板膜和枪头。 附 录 C （资料性） 检测所需仪器 C.1 37℃湿温培养箱； C.2 精密可调移液器（100 μL、1000 μL）； C.3 1 mL、5 mL、10 mL的移液器； C.4 100 mL、1 L、2 L的量筒； C.5 12道移液器（50 μL～300 μL）； C.6 微量振荡器（可选）； C.7 洗板机（可选）； C.8 37℃水浴锅； C.9 酶标仪（含450nm滤光片）。 附 录 D （规范性） 检测所用试剂的配制 D.1 刺激抗原 牛型PPD溶液（10000 IU/mL）和禽型PPD溶液（7500 IU/mL）在使用前彻底混匀，2.5 mL/瓶。 D.2 酶标板 在开封前将酶标板恢复至室温，可放置30 min以上。 D.3 阳性对照和阴性对照 用0.2 mL灭菌纯水分别溶解阴、阳性对照冻干粉。应保证完全溶解，溶解的阳性对照、阴性对照在2℃～8℃可储存1个月，但再次使用前应恢复至室温并充分混匀。 D.4 样品稀释液 恢复至室温并充分混匀，用作血浆稀释缓冲液。 D.5 酶标抗体和酶标抗体稀释液 酶标抗体必须一直保存于2℃～8℃。酶标抗体稀释液可直接使用。按表2配制酶标抗体工作液，现配现用，未用完的试剂应立即丢弃。未用完的酶标抗体应立即放回至2℃～8℃条件下保存。 表2酶标抗体工作液配制表 酶标板数量 酶标抗体的体积 酶标抗体稀释液的体积 1 0.11 mL 11 mL D.6 洗涤液 配制工作浓度的洗涤液，将19份蒸馏水加入1份20倍浓缩的洗涤液中，充分混匀。工作浓度的洗涤液可在室温贮存2周，未用完的20倍浓缩洗涤液应放回至2℃～8℃条件下保存。20倍浓缩洗液可能含有结晶盐，使用前37℃重新溶解结晶。