沉降菌检验标准操作规程[整理].docx

标 准 规 范 standard 意图 论述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，避免出产环境对产品的污染，保证实验室的环境到达检测产品的要求。 适用范围 适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。 人员责任测验人员对洁净室（区）沉降菌的测验。 内容 术语和界说下列术语和界说适用于本规程。 菌落：细菌培育后，由一个或几个细菌繁衍而构成的细菌集落，简称CFU，通常用个数来表明。 沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的办法搜集空气中的活性微生物粒子，经过专门的培育基在适合的成长条件下系繁衍到可见到的菌落数。 沉降菌菌落数：规则时刻内每个平板培育皿搜集到空气中沉降菌的数目，以cfu/皿表明。 测验原理：本测验办法运用沉降法，即经过天然沉降原理搜集空气中的生物粒子于培育基平皿，经若干时刻，在适合的条件下让其繁衍到可见的菌落数，以平板培育中的菌落数来鉴定洁净环境内的活微生物数，并以此来鉴定洁净区的洁净度。 监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一次监控。 测验办法： 运用设备与资料高压灭菌锅：运用时应严厉依照操作规程进行。恒温恒湿培育箱：有必要定时对培育箱进行校验。培育皿：一般选用φ90mm×15mm培育皿。培育基：胰酪大豆胨琼脂培育基（TSA）； 已灭菌制造好的培育基平皿放入30-35℃恒温培育箱中培育72小时，若培育基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好的培育基平皿应放在2-8℃的环境中寄存。清洁剂：75%酒精 测验时刻：（1）对单向流，如A级净化房间内及超净作业台，测验应在净化空调体系正常运转不少于10分钟后开端。（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测验应在净化空调体系正常运转不少于30分钟后开端。（3）培育皿的采样时刻：静态测验时，培育皿露出时刻为30min以上；动态测验时，培育皿露出时刻为不大于4小时。 采样点数及其安置（1）最少采样点数目： 面积(M)（m2） 洁净度等级 A级 B级 C级 D级 M﹤10 2～3 2 2 2 10≦M﹤20 4 2 2 2 20≦M﹤40 8 2 2 2 40≦M﹤100 16 4 2 2 注：表中的面积，关于单向流洁净室（区）、洁净作业台，指的是送风面积，对非单向流洁净室（区），指的是房间面积。 （2）最少培育皿数 洁净度等级 所需φ90mm培育皿数（以沉降4h计） A级 14 B级 2 C级 2 D级 2 （3）采样点安置洁净室（区）采样点安置宜力求均匀，避免采样点在部分区域过于稀少。下列多点采样的采样点安置图示可作参阅（见图1）图1平面采样点安置图A级单向流区域，洁净作业台或部分空气净化设备的采样点宜安置在正对气流的作业面上，气流方式可参阅图2、图3。图2水平单向流的气流方式图3笔直单向流气流方式①作业区采样点的方位离地0.8m-1.5m左右（略高于作业台面）。②取样时，应尽量避免在回风口邻近取样（间隔1m以上），且测验人员应在取样的劣势测，并尽量少走动。可在要害设备或要害作业活动范围处添加采样点。取样时，取样设备会对流发生搅扰，取样时应避免可能对气流组织的搅扰。 测验过程： 采样办法用无菌容器将预先培育的培育基（无菌平皿）放至传递窗，紫外灯照0.5小时，待检测用，将培育皿取出，用75%酒精擦平皿外表，放置在预先确定的取样点，翻开培育皿盖，使培育基外表露出时刻不少于30min，现将培育皿盖，盖后倒置培育。检测时记下培育皿翻开的开始时刻和完毕时刻。 培育：悉数采样完毕后，将培育皿倒置于恒温培育箱中培育。30℃-35℃培育，时刻为72小时。每批培育基应有对照实验，查看培育基自身是否污染，可每批选定3个培育皿做对照培育。 菌落计数用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜查看，是否有遗失。若培育皿上有2个或2个以上的菌落堆叠，可分辩时仍以2个或2个以上计数。 注意事项 测验用具要做灭菌处理，以保证测验的可靠性、正确性。 采纳全部办法避免人为对样本的污染。对培育基条件及参数的具体记载。 因为细菌品种繁复，不同甚大，计数时一般有透射光于培育皿反面或正面仔细观察，不要漏计培育皿边际成长的菌落，必要时用显微镜别。 采样前应仔细查看每个培育皿的质量，如发现蜕变、破损或污染的应除掉。 测验状况 沉降菌测验前，温度在18℃-26℃，相对湿度在45%-65%，洁净区与非洁净区和洁净区与洁净区之间的静压差＞10Pa。 测验人员测验状况有静态和动态两种，并在陈述中注明测验状况。静态测验时，室内测验人员不多于2人。被测验洁净区已消毒，测验人员有必要穿戴契合环境洁净度等级的作业服。 成果核算用计数办法得出各个培育皿的菌落数。均匀菌落数的核算见下式：核算公式：