P（VDF-TrFE）薄膜覆盖ITO微电极的构建及其表面电势调控细胞成骨分化的研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 生物材料的表面电势在介导细胞分化和指导细胞命运方面起着极其重要的 作用。然而，相关研究一般只专注于调控单一的同种表面电势以影响细胞行为， 很少有报道会合理地组合运用不同种的表面电势以发挥出其促成骨功能的最佳 效果。本文通过在氧化铟锡（ITO ）平面微电极上覆盖铁电性的聚偏氟乙烯三氟 乙烯（P(VDF-TrFE) ）薄膜的方式 （即P(VDF-TrFE)@ITO ），构建出具有长程表 面电势 （电场诱导）和短程表面电势 （电荷诱导）可调制的表面，并从长短程表 面电势协同作用的角度，开展了材料表面电势对间充质干细胞（MSCs ）成骨分 化行为的调控规律和作用机制的研究。主要取得了如下的研究成果： 通过旋涂法和流延法可分别制得纳米级和微米级的 P(VDF-TrFE) 薄膜，即形 成 n-P(VDF-TrFE)@ITO 和µ-P(VDF-TrFE)@ITO 。在旋涂法中，薄膜的厚度主要 取决于溶液浓度和旋涂层数；当膜厚达470 nm 时，可以很好地隔绝ITO 微电极 的图案化形貌、微电流和可能存在的电化学效应。在流延法中，薄膜的厚度基本 只与溶液浓度密切相关；当膜厚达3.5 µm 时，P(VDF-TrFE)呈现出良好的结晶性 且能被有效电极化。采用 ITO 微电极施加电场和接触式电极化 P(VDF-TrFE) 薄 膜的方式，即可使µ-P(VDF-TrFE)@ITO 单独或同时具备长程和短程表面电势， 且其大小分别受施加电压 （VEF ）和压电系数 （d33 ）所调制。 当µ-P(VDF-TrFE)@ITO 单独产生长程表面电势或短程表面电势并作用于 MSCs 时，两种电势均可以有效地促进MSCs 的增殖和成骨分化，其中长程和短 程表面电势的最佳值分别对应于 VEF = 1 V 和 d33 = - 1.5 pC/N 。当长程表面电势 和短程表面电势同时操纵时，可进一步显著增强表面电势促 MSCs 成骨分化的效 果，其最佳组合正好是长程表面电势和短程表面电势单独作用时最佳值的叠加， 显示出长程和短程表面电势在共同增强细胞成骨分化中各自独立地发挥作用。 通过对钙离子和整合素介导的相关成骨信号通路的基因测定，µ-P(VDF- TrFE)@ITO 表面电势对 MSCs 成骨分化的作用机制可认为是：长程和短程表面 电势分别强化激活钙离子介导的 PKC 和整合素介导的 FAK 两个上游信号通路， 这两信号通路可能在信号级联的下游产生串扰，从而协同增强 ERK 的活化，最 终显著地上调了成骨基因 Runx2 的表达。上游信号通路的独立性，决定了长程和 短程表面电势共同作用时的表观叠加性。 本文工作对加深认识和理解表面电势与细胞的相互作用有着重要的贡献，对 植入体的表面设计也有着重要的理论指导意义。 关键字：P(VDF-TrFE) ，ITO 电极，表面电势，极化，电场，成骨分化 I 目 录 目 录 摘 要 I ABSTRACT III 第一章 绪论 1 1.1 引言 1 1.2 材料表面与细胞的相互作用2 1.2.1 拓扑结构的影响 3 1.2.2 化学特征的影响 5 1.2.3 物理特性的影响 6 1.3 材料表面电势对细胞生长行为的影响8 1.3.1 对细胞粘附的影响 8 1.3.2 对细胞增殖的影响 9 1.3.3 对细胞成骨分化的影响 9 1.3.4 调控细胞成骨分化的机制探索 10 1.4 材料表面电势的调制 12 1.4.1 表面电荷 12 1