PCR污染的产生及防治（整理版）.ppt

PCR污染的产生及防治 PCR污染的监测 PCR强大扩增能力+检测的敏感性 经30个周期后，特定DNA片段的数量在理论上可增加109倍 极微量的污染便可导致假阳性，尤其对定量造成很大的问题 NTC (No Template Control): 必须设置一个不含模板DNA但含有PCR系统中所有其他成分的对照反应，这一对照管须在准备好所有其他PCR以后才进行吸加。 常见的PCR contamination 常规PCR 荧光定量PCR NTC 4 3 2 1 7 6 5 9 8 NTC 引起PCR污染的原因 模板间交叉污染 容器被污染 模板放置时, 由于密封不严溢于容器外 容器外粘有模板而造成相互间交叉污染 模板吸取过程中, 因气溶胶（aerosol）或其他原因引起移液器污染，从而导致交叉污染 引起PCR污染的原因 PCR试剂污染 PCR 试剂配制过程中, 移液器、容器、水等原因造成试剂被PCR 核酸模板污染。 引起PCR污染的原因 PCR产物污染-最主要最常见 PCR 产物拷贝量大，极微量的PCR产物污染, 就可形成假阳性。 移液器吸取PCR产物进行电泳检测，同一支移液器去准备PCR mix PCR产物的气溶胶污染： 一个气溶胶颗粒可能含几万个拷贝 气溶胶（aerosol）：悬浮于气体介质中粒径一般为 0.001μ