17-第08章 转录物组-定位与降解.pdf

第8章 转录物组- mRNA的定位与降解 什么是mRNA定位-- mRNA location 所谓mRNA定位系指成熟mRNA在输出细胞核进入细胞质 后转移到特定位置进行翻译的过程。 mRNA定位的生物学意义在于： 1）降低蛋白质异位翻译后运输到工作场所的成本； 2 ）蛋白质异位翻译难以在运输过程中保持原有修饰状态； 3 ）蛋白质异位翻译不利于功能复合物的组装； 4 ）靶位翻译可提高蛋白质的修饰与加工效率； 5 ）靶位翻译便于蛋白质的精细调控。 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108 ：16813-16818，2011 mRNA 定位 荧光 标记 检测 技术 Development 139: 3263-3276 , 2012 图中所示为4种mRNA定位检测技术：A) MS2系统 衣壳蛋白MCP可与 专一性RNA序列 （MS2标签）结合。MCP-荧光蛋白融合蛋白与插入目 标RNA分子内的MS2结合即可显示mRNA踪迹；B) 在目标mRNA分子内 插入一段RNA适配体序列，可检测mRNA位置；C) 利用分子信标与目标 mRNA杂交，显示mRNA位置；D)将目标mRNA连接荧光基团直接显示。 mRNA 特 征 分 布 mRNA在转录加工后进入细胞质进行翻译 mRNA出核后在细胞质中不是 随机分布的，而是位于特定的区间就地翻译成蛋白质。A) 利用荧光标记 技术检测爪蟾三期卵细胞Vg1 VLE mRNA在细胞中的分布位置，显示定位 于卵细胞植物极。B) 培养的哺乳动物成纤维细胞中，pkp4 mRNA 3’ UTR 标记显示定位在伪足突起 （pseudopodial protrusions ）（绿色）位置。 Development 139 ：3263-3276 ，2012 mRNA区间定位的普遍性 由于检测mRNA技术的进展，已经发现了大量定 位的mRNA 。2000年之前，发现有近100个不 同类型的mRNA定位于细胞的不同区间, 被认 为仅限于特殊细胞类型。近年来，基因组范围 的研究已经改变了上述看法，mRNA 亚细胞 定位是一种主要的由极化细胞采用的确立蛋白 质在目标区间发挥功能的机制。 在果蝇早期胚胎发育的一项原位杂交实验中，分 析了3 370个转录产物，其中2 314个转录物 （70% 以上）发生了亚细胞的不同定位。 Cell 13:174-187, 2007 mRNA的定位机制 1) 局部合成（local synthesis ） 如哺乳动物乙酰胆碱受体 mRNA在肌原纤维（myofibres ）神经肌肉连接处的细 胞核中合成； 2) 局部保护性降解 （local protection from degradation ） 通过降解错误定位的mRNA来确保正确的场所只保留 正确的mRNA； 3) 被动扩散 借助细胞骨架的极性分布，mRNA被动转移 到靶位翻译； 4) 区域捕获 （local trapping ）主动运输, 依赖顺式元件和 反式因子互作转移到工作场所。 Nature Reviews Molecular Cell Biology 6:363-375 ，2005 mRNA的定位—主动转移 大多数mRNA的细胞区域定位采取主动转移路线，这一过 程涉及4个步骤： 1）成熟的mRNA在细胞核中与hnRNP结合(RNP)转移到细 胞质； 2 ）进入细胞质的RNP进行重构（remodelling ）,形成细胞 质RNP,并转移到胞质小体（granule ）； 3）含有转移mRNA的细胞质RNP装载转运马达，沿着细胞骨 架（微管或微丝）运输到打靶位置; 4 ）转移mRNA到达目的位置后卸载，锚定到微丝蛋白，随 后进入翻译。 Cell 136：719–730, 2009