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Southern 杂交
1 实验背景——概念及应用
Southern杂交（Southern blot）：是进行基因组DNA特定
序列定位的通用方法。
应用
可进行克隆基因的酶切
图谱分析
基因组中某一基因的定性及
定量分析基因突变分析
限制性片段长度多态性分析
1975年由英国科学家
（RFLP）
E. M. Southern创建
1 实验背景——原理
原理具有一定同源性的 特点 利用标记的探针与膜上
靶DNA片段进行杂交的
两条核酸单链在一
技术，检测靶DNA片段
定的条件下，可按 中是否存在与探针同源
的序列
碱基互补的原则特
异性地杂交形成双
此过程是高度特异性的
链。
1 实验背景—— Southern杂交的基本过程
核酸制备 Southern转膜 探针制备 Southern杂交
•制备待测 •DNA限制酶消 •用PCR法制 •预杂交：将膜上
DNA 化 备 能与DNA结合的
•电泳检测 •电泳分离待测 •探针加热变 位点封闭
DNA样品 性成为单链 •杂交：预杂交后
•凝胶预处理 DNA 的膜转入含标记
•凝胶中的单链 •探针可以用 探针的DNA杂交
DNA片段转移 放射性物质 液中反应
到固相支持物 标记或用地 •洗膜
上（尼龙膜） 高辛标记 •检测
•地高辛标记
没有半衰期，
安全性好
2 实验设计
利用标记的探针与膜上靶DNA片段进行杂交的技术，检测
靶DNA片段中是否存在与探针同源的序列
DNA限
制酶消 探针
化及 转膜
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