植物组织培养幻灯片3论述.ppt

第二节 培养基及其配制 一、培养基的成分 1 、无机营养（大量元素、微量元素） 2 、氨基酸 3 、有机附加物（香蕉汁、番茄汁等） 4 、维生素类 5 、糖类（蔗糖） 6 、琼脂 7 、植物生长调节物质（ IAA 、 CTK ） 8 、活性炭（吸附有毒有害物质） 二、培养基的 pH ＆ 大多数植物要求培养基的 pH 为 5.6 ~ 5.8 ＆ 用 0.1 mol/L 的 NaOH 和 0.1 mol/L 的 HCl 来 调节其 pH ＆ pH ＞ 6.0 ，培养基变硬， pH ＜ 5.0 ，琼脂不 容易凝固 三、常用培养基的种类、配方及其特点 （一）培养基的种类 1 、根据形态，分为固体培养基、液体培养基 2 、根据培养过程，分为初代培养、继代培养 3 、根据作用，分为诱导培养基、增殖培养基、生根培养 基 4 、根据营养水平，分为基本培养基（ MS 、 White 、 B 5 、 N 6 等）、完全培养基 （二）几种常用培养基的配方 ＆ 注意单位： MS 、 White 、 N 6 、 B 5 、 Heller 、 Nitsh 、 Miller 、 SH 等具体见 P 17-18 （三）几种常用培养基的特点 ＆ MS 培养基：无机盐浓度高，营养丰富 ＆ White 培养基：无机盐浓度低（生根培养、 胚胎培养） ＆ N 6 培养基： KNO 3 、（ NH 4 ） 2 SO 4 含量高， 无 Mo ＆ B 5 培养基： NH 4 + 浓度低， NO 3 - 、盐酸硫胺素 含量高（适合于木本植物） ＆ SH 培养基：与 B 5 相似，不用（ NH 4 ） 2 SO 4 而 用（ NH 4 ） H 2 PO 4 ，矿质盐浓度较高 ＆ Miller 培 养 基 ： 无 机 元 素 用 量 较 MS 减 少 1/3~1/2 ，微量元素种类减少，不含肌醇 四、培养基的配制 （一）母液的配制与保存 1 、母液的配制 一般将母液分成大量元素、微量元素、 Fe 盐、维生素、 氨基酸等母液；植物生长调节物质也可单独配制成母液， 一般浓度为 0.5 ~ 1 mg/ml ； 2 、母液的保存 一般将母液保存在 0 ~ 5 ℃ 的冰箱内保存（分别在母液 瓶上贴上标签）。 （二）培养基的配制及其灭菌 1 、培养基的配制方法 将母液按顺序放入烧杯 加入生长调节物质 加琼脂 加糖 定容 熔化琼脂 调整 pH 培养基分装到培养瓶中 加盖贴标签（注明培养基 的名称与配制时间） 2 、培养基的灭菌 条件：压力： 108 kPa 温度： 121 ℃ 时间： 15 ~ 20 min 注意事项： 1 、 培养基分装时，一般占试管、三角瓶 等培养容器的 1/5 ~ 1/3 为宜，若为塑料 瓶，则培养基的厚度应为 1.5 ~ 2.0 cm 。 2 、分装后应立即灭菌，若不及时灭菌应 保存在冰箱中， 24 h 内完成灭菌工作。 3 、生长调节物质遇热不稳定，应使用过滤 灭菌法，不应进行高压灭菌。 4 、培养基灭菌后，需在培养室内预培养 3 d ，若无污染，证明培养基可用，最好在 2 周内用完，最长不超过 1 个月，含吲哚乙 酸或赤霉素的培养基 1 周内使用，暂时不用 的放置在 10 ℃ 或 4 ~ 5 ℃ 的冰箱内保存。 第三节 外植体的选择与培养 一、外植体的选择 1 、选择优良的种质： 材料的选择要有目的、 具有一定的代表性、提高成功率、增加实用性。 生长健壮、无病虫害的植株作为外植体来源。 2 、选择健壮的植株： 选取发育正常的器官或 组织，再生能力强，组培易成功。 3 、选择最适的时期： 一般按植物生长的最适时期选取材料。 4 、选择合适的大小： 太大容易污染，太小，多形成愈伤组织甚 至难于成活，一般在 0.5 ~ 1.0 cm 之间。 补充：外植体的类型 1 、茎尖（园艺植物组织培养中应用最多， 繁殖率高，不易发生遗传变异，但取材