拟南芥alpha_dioxygenase1的原核表达_纯化及活性的检测.pdfVIP

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2021-02-15 发布于河北
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拟南芥alpha_dioxygenase1的原核表达_纯化及活性的检测.pdf

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华北农学报 ·2008 ,23 ( 3 ) : 9 12 拟南芥 Alphadioxygenase 1 的原核表达、纯化及活性的检测 1 ,2 1 1 2 1 ,3 1 ,3 张小梅 ,韩念法 ,张美祥 ,李广录 ,范三红 ,郭蔼光 ( 1. 西北农林科技大学生命科学学院 ,陕西杨凌　712100 ;2. 河南科技大学农学院 ,河南洛阳　471003 ; 3. 陕西省农业分子生物学重点实验室 ,陕西杨凌　712100) 　　摘要 :从经水杨酸处理的拟南芥开花期植株中获得 cDNA ,扩增得到 Alphadioxygenase 1 ( DOX 1) 基因 ,进行原核表 ( ) + 达、纯化和生物活性检测。利用原核表达载体 pMALc4x 在 T7 Express Competent E. coli 和BL21 DE3 RIPL codon 菌株 ( ) + 中表达 DOX 1 ,经 Amylose Resin 亲和层析柱纯化。SDSPAGE 结果表明 ,重组融合蛋白在 BL21 DE3 RIPL codon 中的表达通过灰度值比较分析以可溶性为主 ,表达率约 3. 7 % ,纯化的 DOX 1 纯度可达 45 % 。愈创木酚法表明 ,可溶性重组蛋白不具有过氧化物酶活性 ;2 ,4DNP 法测试表明可溶性重组蛋白具有脂肪酸双加氧酶活性。关键词 :Alphadioxygenase 1 ;重组表达 ;2 ,4DNP ;亲和纯化 ;活性 ( ) 中图分类号 :Q786 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000 - 7091 2008 03 - 0009 - 04 Expression , Purification and Activity Analysis of Arabidopsisdioxygenase 1 ZHANG Xiaomei1 ,2 ,HAN Nianfa1 ,ZHANG Meixiang1 , LI Guanglu2 ,FAN Sanhong1 ,3 ,GUO Aiguang1 ,3 ( 1. College of Lifesciences ,Northwest Agriculture and Forestry University ,Yangling　712100 ,China ; 2. College of Agronomy ,Henan University of Science and Technology ,Luoyang 　471003 ,China ; 3. Key Laboratory for Molecular Biology of Agriculture of Shaanxi Province ,Yangling 　712100 ,China) Abstract :Recombinant DOX 1 was clone