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“微” 观影响 微核角度观察污染物对植物生长的影响 CONTENTS 目 录 实验目的 实验原理 实验过程 课后设计 实验目的 实验原理 实验过程 1、了解细胞微核形成的机理及其形态特点； 2、学习植物根尖细胞的微核实验技术； 3、运用所学技术设计简单遗传毒性实验。 实验目的 实验原理 实验过程 微核的定义： 微核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。 微核的形成： 母细胞 有丝分裂 子细胞 实验目的 实验原理 实验过程 实验材料： 玉米、大麦、黄豆等。 实验仪器和设备： 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊子、培养皿、计数器、载玻片及盖玻片等。 实验目的 实验原理 实验过程 实验步骤： 1、浸种催芽：将实验用的种子按所需要的量放入盛有自来水的烧杯中，浸泡24h，期间至少换水两次。种子吸涨后，倒掉水分，将种子平铺于浸湿的双层滤纸上，并用双层纱布覆盖，经36~48h萌发，大部分初生根长至1~2cm。 实验目的 实验原理 实验过程 2、根尖染毒：阳性检测采用不同浓度的PbSO4溶液，对照用自来水处理，处理时间24h。 3、固定：用甲醛：冰醋酸（3：1）固定液固定24h后弃去固定液，70％酒精中保存。 固定：借助于物理方法或化学药剂的作用，迅速透入组织和细胞将之杀死，并且使其结构和内含物如：蛋白质，脂肪，糖类以及核物质与细胞器等，在形态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态，同时更易于染色，可以较清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。 实验目的 实验原理 实验过程 4、酸解：取出根尖，用清水漂洗2-3次，吸净水，加入6M盐酸，于室温解离10min，弃去盐酸，漂洗根尖2-3次，彻底洗净盐酸。 酸解：去除未固定的蛋白质, 同时使胞间层的果胶类物质解体，细胞分散而易于观察。 5、染色：截下1-2mm长的根尖，滴加苯酚品红染液，染色10min，加盖玻片，压片观察。 染色：染色体容易被碱性染料染成深色，苯酚品红染液是生物学上常用的碱性染料。 实验目的 实验原理 实验过程 实验结果观察： 1、首先在低倍镜中找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察，找到微核。 2、微核识别标准：（1）在主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。（2）小核着色与主核相当或稍浅。（3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。 3、每一个处理组观察3个根尖，每个根尖计数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，计算平均数，即为该处理的MCN‰，即微核千分率。 实验目的 实验原理 实验过程 示例图片： 实验目的 实验原理 实验过程 课后思考及实验设计： 利用所学微核实验技术，选取自己认为有污染的液体进行植物根尖微核实验的设计。 实验目的 实验原理 实验过程 谢 谢 大 家 大家好，我是公共卫生学院教师XXX，今天我们来学习环境生物学中一种非常重要的遗传毒性检测方法。 * 在开始讲课之前，我给大家讲一个故事，假如，你是一个农场主，一年前，附近3公里的地方建了一个工厂，经常排放一些废水废气等污染物，咱们理所当然的认为这些污染物肯定会对我们的农作物产生影响。因此你就去当地政府讨说法，当地政府要你拿出证据，那，假如你是一个有生物知识的农场主，肯定能拿出确凿的证据。今天，我们就来讲讲这个证据。我们从微核的角度来探讨污染物对植物生长的影响。 * 下面呢，我们从以下几个方面和大家一起学习微核实验技术。 * 首先，这个实验的目的是让大家在了解微核形成的机理及其形态特点，学习植物根尖细胞微核实验技术的基础上，设计类似的遗传毒理学实验。 * 我们高中生物课本中讲过，细胞是通过有丝分裂进行增殖的，在细胞分裂的后期，纺锤丝通过着丝粒牵引着染色体移向细胞两极，在这个过程中，如果受到外界刺激，染色体和着丝粒之间连接断裂，丧失着丝粒的染色体断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块，直径大约是细胞直径的1/20~1/5，这就是微核。它是常用的遗传毒理学指标之一，能够指示染色体或纺锤体的损伤。目前运用于辐射损伤、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。 * 下面我们通过具体的实验过程来观察微核的形态，学习微核试验技术。在考试实验之前，大家想想，我们想要观察到微核，根据它的形成原理，我们是不是需要选择大量正在进行有丝分裂的细胞进行观察呢？ 植物根尖分生区是不是正好满足我们的要求呢？于是，我们选择玉米，大麦或者黄豆等常见的农作物种子进行实验。 在所需要的以期方面，大家想一下，将种子萌发长出幼根，观察细胞，细胞计数都需要用到哪些仪