免疫学 沉淀反应.pptVIP

? 分类 火箭免疫电泳 ( rocket immunoelectrophoresis ) 对流免疫电泳 ( counter immunoelectrophoresis ) ( 一 ) 对流免疫电泳 ? 对流免疫电泳 是双向免疫扩散与电泳相结合，在电场中加速定 向扩散的双向免疫扩散技术。 1. 基本原理 在 pH8.6 的琼脂凝胶中， 大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，且 分子较小，电泳时，泳向正极。 抗体带弱负电荷，但分子量大，电泳力小于电渗 力，泳向负极。 抗原和抗体相遇，比例合适时形成肉眼可见 的沉淀线。 2. 技术要点 ? ? 制板，在琼脂板上成对打孔，加抗原和抗体。 电泳后观察结果。 3. 方法评价 操作简便。 ? 灵敏度较高，比双扩高约 10 倍。 ? 分辨率低于双扩。 ? 4. 临床应用 ? 常用于抗原或抗体的定性分析、效价测定和纯度鉴 定等 ( 二 ) 火箭免疫电泳 ? 火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散和电泳相结合，在电场中 加速定向扩散的单向免疫扩散技术，由于其沉淀形 似火箭，故称为火箭电泳。 1. 基本原理 ? 电泳与反应 抗原在电场作用下，在含有适量抗体 的凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯度浓度，在抗原 抗体比例适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉 淀带越来越窄，形成火箭峰样沉淀带，峰形高低与 抗原量呈正相关。 ? 结果分析 用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲 线，根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的 含量。 2. 技术要点 ? 制板与打孔 ： 电泳 ：样品孔侧置负极电泳。 ? ? ? 结果 ：电泳完毕，观察琼脂板上沉淀峰，测量 ( 从孔 中心到峰尖的高度 ) 。 计算 : 以峰高为纵坐标，抗原浓度为横坐标 ( 对数 坐标 ) ，绘制标准曲线，求出待检样品抗原浓度。 3. 方法评价 操作简便 ? 灵敏度较高（ mg/L ） ? 4. 临床应用 1. 抗原蛋白定量，如 IgA 、 IgG 、 IgM 和 sIgA 检测。 2. C3 、 C4 及其裂解产物检测。 3. AFP 等检测 已被免疫浊度分析取代。 三、定向自由扩散 ? 是将区带电泳与免疫扩散相结合的免疫化学 分析技术 。 （一） 免疫电泳 （ immunoelectrophoresis ， IEP ） ? 免疫电泳 是将区带电泳与双向免疫扩散相结合的一 种免疫化学分析技术 。 1. 基本原理 ? 电泳 Ag 在凝胶上进行电泳，被分离成不同区带。 ? 反应 在 停止电泳后，在与电泳方向平行挖一条 形槽，加入相应抗血清，使抗原和抗体呈双向扩 散，在二者比例合适处形成肉眼可见的弧形沉淀 线。 根据沉淀线的数量、位置和形状，可分析、鉴 定样品中所含抗原成分及其性质 。 2. 技术要点 制板与打孔 ： ? 加样 ：加入待检抗原标本或正常血清对照。 ? ? ? 电泳 ：抗原一端接阴极，电泳 1.5 ～ 2h 。 反应 ：挖一小槽，向槽内加入抗体，使抗原抗 体双向扩散。 观察结果 ：放置 24h 后，观察沉淀线的数目、 形状和位置。 ? 3. 方法评价 ? 主要优点 : 特异、分辨率高 4. 临床应用 主要用于： ? 纯化抗原或抗体的成分分析。 ? 异常体液中蛋白质分析，如无丙种球蛋白血 症、白血病等病人的血清蛋白成分的分析。 ( 二 ) 免疫固定电泳 （ immunofixation electrophoresis ） ? 区带电泳与 免疫沉淀 反应相结合的免疫分析 技术。 （一）原理 似免疫电泳，不同之处是电泳后 直接将抗 体作 用于被分离的各组分蛋白质，抗 Ag-Ab 发 生反应，使 Ag 在电泳位置上被免疫固定。 2. 技术要点 ? 电泳 先将抗原作区带电泳，分离成不同区带 沉淀反应 ? ? ? 电泳后，将 Ab 加于蛋白质区带表面， Ag 与 Ab 发生沉淀反应，形成的 CIC 嵌于固相支持物中。 洗去游离的 Ag 或 Ab ，显示出被结合固定的某种蛋白质。 3. 方法评价 简便、快速 ? 灵敏度高于免疫电泳 ? 4. 临床应用 ? 可用于鉴定具有近似迁移率的多种蛋白 如各种 M 蛋白、补体的裂解产物、免疫球蛋白的 轻链型别； 脑脊液、尿液或其他体液中微量蛋白的检测与 鉴定。 第三节 ? 免疫浊度分析技术 （ immunoturbidimetry ） 免疫浊度测定 是将液相内的 沉淀试验 与 现代光学仪器 和 自动 分 析技术相结合的一项分析技术。 ? 当 可溶性抗原 与相应的抗体特异结合，可以形成不 溶性的 CIC ，使反应液出现浊度。用仪器检测浊度， 推算出复合物的量。 ? 免疫浊度测定按测量方式分为 透射免疫比浊法 （ turbidimetric immunoassay 或 turbidimetry ） 散射免疫