甲胎蛋白测定化学发光法.pdf

西安长安医院 甲胎蛋白 (AFP ) 测定 文件编号： CA-JY-CZ-MY 检 验 科 第 二 版 ( 化学发光法 ) 执行日期： 2010-1-4 共 5 页 第 1 页 １ 原理 AFP 是胚胎时期的重要血清成分，由内黄囊和肝细胞合成，胎儿出 生后其浓度急剧下降，几个月至一 年可降至正常水平，正 常值小于 20ng/ml 。本检验科使用日本东曹 AIA-1800 型全自动免疫发光分析仪进 行 测定，采用微粒子捕捉酶免疫分析技术 (MEIA) 。 AFP 测定利用双抗体夹心法原理：已包被了抗体的塑料微珠试剂中，加 入待测标本后，经温育，再加入碱性磷酸酶标记的抗体、形成“抗体－ 抗原－酶标记抗体复合物” 。然后将其转移到玻璃纤维柱上，用缓冲液 洗涤，没有结合的抗原、酶标抗体被洗掉，结合抗原抗体的塑料微珠则 被保留在纤维柱滤膜的上方。这时再加入底物： 4- 甲基伞型酣磷酸盐 (4-Mup) 。酶标抗体上的碱性磷酸酶将 4-Mup 分解 ,脱磷酸后形成甲基伞 型酣 (4-Mu) ，它在 365nm 激发光的照射下，发出 448nm 的荧光，经过 荧光读数仪的记录、放大，计算出所测物质的含量。 2 标本采集与处理 2.1 原始样本类型：血清、血浆或全血（应用抗凝剂为肝素钠、枸橼酸钠、 ACD 、CPDA-1 或 EDTA）、尿液 (晨尿、随即尿、 24 小时尿等 )或其他 体液 (羊水等 )。 2.2 样本量：根据不同项目样本量不等（ 83 μl-238 μl）。 2.3 患者准备：严禁使用接受过鼠单克隆抗体诊断或治疗的病人样本，引起 体内含有人抗鼠抗体（ HAMA ），当这些样品在使用含鼠单克隆抗体分 析试剂进行测试时，引起结果升高或降低。 2.4 样本采集方法：一般采用静脉采血。 样本采集要求： 避免过度溶血，必须在无菌体条件下采集； 确保离心速度 （10000 转/分钟）和时间 （10 分钟），避免颗粒物质的干扰。 避免样品的反复冻融，溶解后的样品需低速震荡或轻轻颠倒混匀已获得 稳定的结果。若样品中有颗粒物质，红血球或浑浊物质必须离心使其澄 清后再进行测试。 2.5 样品的稳定期和保存：上机 3 小时内完成检测； 2℃-8℃标本可保存 1-14 天；若需长期保存（ 1 年内），必须将血清分离出来，冷冻保存（ -10 ℃或 更冷）。 3 试剂 3.1 所有试剂均购自日本东曹公司 TOSOHⅡ相关校准品 TOSOHⅡ相关校准品 1 TOSOHⅡ相关校准品 2 TOSOHⅡ样本稀释液 TOSOHⅡ基质： 4- 甲基伞形酮酰磷酸 TOSOHⅡ基质溶解液 TOSOHⅡ清洗液 TOSOHⅡ缓冲液 3.2 试剂准备与检查： 从冰箱中取出 1 号液（底物液）放入仪器 从冰箱中取出相关测试