发光原理介绍罗氏贝克曼.pdfVIP

电化学发光免疫测定 （Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI ） 是继放射免疫、 酶免疫、 荧光免疫、 化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术， 是电 化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般的化学发光（ CL） 不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应， 实际上包括了电化学和化学发 光二个过程。 ECL与 CL 的差异在于 ECL是电启动发光反应， 而 CL 是通过化合物混合启动发光 反应。ECL不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于 DNA／RNA探针检测。 其检测原理（以 TSH检测为例）：第一步：结合了活化的三联吡啶钌衍生物即 [Ru(bpy) 3] 2+ + N 羟基琥珀酰胺酯（NHS）的 TSH抗体和结合了生物素的 TSH抗体与待测血清同时加入一个反应 杯中孵育 9 分钟。 第二步： 将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中， 再次孵育 9 分钟，使生物素通过与亲和素 的结合将磁珠、TSH 抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。 下一步，蠕动泵将形成的 [Ru(bpy) 3 ] 2+－抗体－抗原－抗体－磁珠复合体吸入流动测量室， 此 时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。 同时，游离的 TSH抗体 （与生物素结合的和 2+ 与[Ru(bpy) 3] 结合的抗体）也被吸出测量室。 紧接着，蠕动泵加入含三丙胺（ TPA）的缓冲液，同时电极加电压，启动 ECL反应过程。发光 2+ 剂 [Ru(bpy) 3] 和电子供体 TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应， 使二价的 2+ + ● [Ru(bpy) 3] 被氧化成三价，后者是一种强氧化剂； 另一方面，TPA被氧化成阳离子自由基 TPA ， + ● 后者很不稳定，可自发失去一个质子（H ），形成自由基 TPA ，这是一种很强的还原剂，可将 一个电子给三价的[Ru(bpy) 3] 3+ ，使其形成激发态的[Ru(bpy) 3] 2+，而 TPA 自身被氧化成二丙胺 2+ 和丙醛。激发态的[Ru(bpy) 3] 通过荧光机制衰减，发射出一个波长 620nm的光子，重新生成 基态的[Ru(bpy) 3] 2+ 。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光 2+ 强度，光强度与[Ru(bpy) 3] 的浓度呈线性关系, 故可测出待测抗原的含量。 最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。 IMMULITE Ⅰ 美国德普(DPC)公司开发成功的 IMMULITEⅠ型酶放大化学发光自动化分析仪及其配套的各项 检测试剂盒是在