质粒DNA 的提取、定量、酶切与PCR鉴定实验报告.docVIP

质粒DＮA得提取、定量、酶切与PＣR鉴定 一、实验目得 1、学习并掌握用碱裂解法提取质粒DNＡ得方法; 2.学习并掌握了解质粒酶切鉴定得方法; 3、学习并掌握紫外吸收检测DNA浓度与纯度得原理与方法; 4、学习并掌握ＰＣR基因扩增得实验原理与操作方法; ５。学习并掌握水平式琼脂糖凝胶电泳得原理与使用方法。 二、实验原理 １、ＰCR(多聚酶链式反应) 　在DNA聚合酶催化下,可以ＤNＡ为模板,以特定引物为延伸起点,以dNTP为原料,通过变性、退火、延伸等步骤, 在体外(缓冲液中)复制ＤNA,使目得DＮA按2n方式呈指数形式扩增。 PCR一次循环得具体反应步骤为: A。变性:加热反应系统至9５℃,使模板DNA在高温下完全变性,双链解链 。 B。退火:逐渐降低溶液温度,使合成引物在低温(35—70℃,一般低于模板Tm值得5℃左右),与模板ＤＮA互补退火形成部分双链。 C。延伸:溶液反应温度升至中温72℃,在 Taｑ酶作用下,以ｄNTＰ为原料,引物为复制起点,模板DNA得一条单链在解链与退火之后延伸为一条双链。 2、质粒DＮＡ得提取与制备 (1)、碱裂解法: 染色体ＤNA与质粒DNA得变性与复性存在差异: A、高碱性条件下,染色体ＤＮA与质粒DNA均变性; Ｂ、当以高盐缓冲液调节其ｐＨ值至中性时,变性得质粒ＤＮA复性并保存在溶液中,染色体ＤNＡ不能复性而形成缠连得网状结构,可