植物组织培养资料.doc

第一章绪论 第一节 植物组织培养的基本概念 一、 植物组织培养： 将植物的任何部分，不论是细胞、组织或器官，从母体上分离岀來，在无菌的人工培 养基上培养，并使Z生长发育的技术，叫植物组织培养。 二、 外植体： 进行组织培养时，将植物的乞个部分从母体上分离出来，以此作为培养材料，这部分 材料就称为“外植体”。 三、 脱分化 一个成熟细胞转化为分生状态的过程叫做“脱分化”。 四、 愈伤组织 原指植物在受伤Z后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组织培养屮，则指在人工培 养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。 五、 再分化 途径： 1、 器官发生型f愈伤组织 2、 胚状体 六、 胚状体 由体细胞经过类似于生殖细胞形成合子胚的发育过程而产生的体细胞胚。 七、 细胞的全能性 德国植物学家G. Haber 1 andt于1902提出的假说,在1958年由Steward通过胡萝卜 的形成层诱导的胚状体得到证明 具有生命力的植物体细胞，即使是单独状态，如果置于适当条件下，使细胞进行分裂和增 殖，这个体细胞也具有发冇成为一个植物体的潜在能力，并且该植物体具有原植株的全部 遗传特性。 第二节植物组织培养的种类 一、 根尖培养 二、 茎尖培养 三、 形成层培养 四、 胚培养 五、 薄壁组织培养 六、 愈伤组织培养七、细胞培养 八、 花药和花粉培养 九、 胚珠或了房培养 十、原生质体培养 十一、花瓣、萼片、花丝、叶片等其它器官培养 第三节植物组织培养的优点 一、 研究材料来源单一，无性系遗传背景一致 二、 经济方便，效率高三、条件可控误差小 四、 生产周期短，重复性强 五、 周年试验或生产 第四节 植物组织培养的应用与发展前景 一、 无性系的快速繁殖菊花、月季、玫塊、兰花、郁金香、香石竹、柑橘、苹果等的优良 苗木、人工种子 二、 去除病毒、真菌、和细菌病害，用于良种緊育马铃薯、草莓、大豆、各种无性繁殖的 花卉等 三、 培育新品种的得力手段 体细胞融合、芽变、辐射及化学诱变、遗传转化的理想受体、单倍体冇种 四、 种质资源的保存800个匍萄品种的试管苗的保存仅占地lml节省人力、物力，配合 低温冷藏技术的使用，会发挥更大的优势。五、次生代谢产物的生产细胞悬浮培养三角叶 薯预，产生薯预皂玳；培养鞘粟产生可待因；培养甜叶菊产生甜味剂、培养紫草产生紫草 素等，已经出现了商品生产的可能 复习思考题 概念：（重点掌握） 1植物组织培养、2外植体、3脱分化、4再分化、5胚状体、6愈伤纽?织 问答题：（一般了解） 1、 植物纟H?织培养的应用与发展前景 2、 植物组织培养的优点 第二章实验室设计、基本设备及操作 第一节实验室的设计与要求 一、 准备室 设计原则：20平方米左右，明亮、通风，宜大不宜小 基木功能：器皿洗涤、培养基的配制、试管苗的岀瓶等丁作 二、 无菌接种室 功能：无菌操作场所，外植体的消毒、无菌材料的继代、原生质体的分离和培养物的转移; 组织培养的核心工作在此完成。要求：无菌室要干爽安静、清洁明亮，宜小不宜。 设备：超净工作台，超净空气的流速24?30米/分钟。 三、 组织培养室培养架、空调机、控温仪等。大小视工作需要和生产规模而定。 第二节操作技术 —、洗涤 （一） 、洗涤液 洗衣粉、洗洁精、漂水、锯酸洗液 倂酸洗液的制备：50克重倂酸钾加入1升蒸馅水，加温溶化，冷却后，再缓慢注入90亳 升工业硫酸。 （二） 、器具的洗涤 1、 新玻璃器皿 2、 一般器 111L 3＞吸管、滴管 4、接种用剪、刀、银子等 二、 灭菌 （一） 、灭菌的一般问题 “菌”包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其它微生物。 有菌的范畴：凡暴霽在未经处理的空气屮的物体、曾经接触过自然水源的物体，至少它的 表面毫无例外都是有菌的，它的内部在未经证实Z前，也应以有菌物看待。 无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸点过的物体，经其他物理的或化学的灭菌方法处理过后的 物体，是无菌的；高层大气、岩石内部、健康动植物未与外表血接触的组织内部是无菌的。 （二） 、灭菌方法 物理方法： 湿热灭菌（热的水蒸气,120 °C）, 干热灭菌（热空气140°C , 4小时, 射线处理（伽马射线）， 过滤除菌 化学方法： 抗生素、消毒剂 升汞一HgC12, 0. 1-1.0%,（稳定，可以长期保存） 70%酒精，（易挥发） 10-15%漂白粉（不稳定，现用现配） 1、培养基的灭菌： 湿热灭菌,1. Ikg/cm2, 121°C, 15-20分钟。2、不耐热的物质的灭菌:过滤除菌 ：3、玻璃器1111及耐热用具的火菌干热火菌，140°C, 4小时4、无菌操作器具的火菌酒精灯 灼烧灭菌5、植物材料的灭菌 复合消毒剂灭菌，酒精、升汞或漂白粉，无菌水冲洗数次 三、 无菌操作（接种） 1、 植物材料的初步清洗； 2、 植物材料