植物组织培养技术基础实验.doc

实验一植物组织培养技术基础实验 首先介绍木学期共有5个小实验，分为2大类，三项实验，1类是植物组织培养，另1类是动物细 胞培养。第一项实验是植物组织培养，包含3个小实验，即实验一：植物组织培养技术基础实验；实 验二：MS培养基的配制与灭菌；实验三：愈伤纟R织的诱导。在动物细胞培养的实验屮包含2个小实验, 分别第二项实验，是实验四：动物细胞培养液的配制与灭菌；第三项实验，实验五：动物细胞的组 织块培养。 提出实验要求，注意实验各项内容的安全，包括实验试剂的使用，实验室的使用，实验仪器的 使用，实验动物的处理等。下面开始学习实验一。 一、 实验目的： 了解植物纟R织培养实验室的设置及基木设备，学习基木仪器设备的使用原理与方法，掌握植物 组织培养的一些基本技术。 二、 实验内容： （一）组培实验室的设置 一个标准的组织培养实验室应当包括：准备室、接种室、培养室、驯化室等，准备室又称为化 学实验室或通用实验室，可由洗涤室、培养基配制室和灭菌室构成。在实际屮可结合可行条件，合 并一部分。各分室能满足实验准备（器血的洗涤与存放、培养基制备和无菌操作、用具的灭菌）、 无菌操作和控制培养三项基木工作的需要。 1、 准备室 rti洗涤室、培养基配制室和灭菌室构成。 （1） 洗涤室（cleaning room） 用于玻璃器皿和实验用具的洗涤、干燥和贮存；培养材料的预处理与清洗；组培苗的出瓶、清 洗与整理等。 室内应配备大型水槽，最好是白瓷水槽。为防止碰坏玻璃器皿，可铺垫橡胶。上下水道要畅通。 备有槊料筐，用于运输培养器血。备有干燥架，用于放置干燥涮净的培养器皿。 （2） 培养基配制室 用于培养基的配制。 要求房间宽敞明亮、通风、干燥、清洁一卫生，便于多人同时操作；有电源、白来水和水槽（池）， 保证上下水道畅通。有时可将配制室内部间隔为称量分室和配制分室。规模较小时，配制室可与洗 涤室合并为准备室。 仪器与用具配置：电了分析天平、托盘天平、磁力搅拌器、蒸镭水器、酸度计、恒温水浴锅、 电炉（或微波炉、电饭煲、液化气炉灶等）、冰箱等仪器设备；移液管（或微量移液器）、移液管 架、培养瓶（包括试管）、棕色或透明试剂瓶、烧杯（带或不带刻度）、量筒、容量瓶、培养血、 吸管、打孔器、玻璃棒、标签纸、记号笔、耐高温高压報料薄膜等封口材料、周转筐、尼龙绳、脱 脂棉、纱布、工作台、蒸億水桶、医用小推车等用品和用具。此外，配备器械柜和药品柜，分别存 放接种用具和分类存放化学试剂（可改为药品）。最好配备防尘设备，以减少灰尘污染。 （3） 灭菌室 用于培养基、器1U1、工具和其他物品的消毒灭菌。 要求安全、通风、明亮；墙壁和地面防潮、耐高温；配备水源、水槽（池）、电源或煤气加热 装置和供排水设施；保证上下水道畅通，通风措施良好。生产规模较小时，可与洗涤室、配制室合 并在一起，但灭菌锅的摆放位置要远离天平和冰箱，而且必须设置换气窗或换气扇，以利通风换气。 仪器与用具配置：高压灭菌锅、干热消毒柜或烘箱、细菌过滤装置、工作台、培养基存放架或 橱柜、周转筐、换气扇、医用小推车等。 2、 无菌操作室（transfer! ng room） 进行植物材料的接种、培养物的转移等无菌操作，因此接种室也称为无菌操作室。其?无菌条件 的好坏对组织培养的成功与否起着重要作用。 在工作方便的前提下，接种室宜小不宜大，一般7?8乳，要求地血、天花板及四壁尽可能密闭 光滑，易于清洁和消毒。配置推拉门，以减少开关门时的空气扰动。 接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置常装1-2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好 安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。 仪器与用具配置：超净工作台、空调机、解剖镜、接种器具消毒器（或高温焚化炉）、紫外光灯、 酒精灯、广口瓶、三角瓶、搪瓷盘、接种工具、手持喷雾器、工作台、搁架、接种用的小平车、不 锈钢长方形饭盒（盛放70?75%酒精，川于浸泡接种工具）或医院川消毒盒等。配置污物桶，以便存 放接种过程屮的丢弃物，须每天清洗更换。 进入无菌室前，为了防止带菌空气肓接进入接种室和工作人员进出接种室时带进杂菌，接种人 员在缓冲间更衣、换鞋、洗手、戴上口罩后，才能进入接种室。应当在此室内安装灭菌用的紫外灯。 3、 培养室 （culturing room） 培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数忖、 及其他附屈设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙 壁要求有绝热防火的性能。 培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设5、6层，最低一层离地高约 10-20cm,其他毎层间隔30cm左右，培养架即高l?7m左右。培养架长度都是根据口光灯的长度而设 计，如采用40W U光灯,则