组培培养基配制流程及注意要点.docx

配制培养基时要预先做好准备，首先要依据培养物和培养目的确定其培养基配方；再根据培养材料以及实验处理的多少，确定其培养基的用量；然后准备好所需的用具。 培养基配制程序如下： 将贮存的各种母液按顺序依次放好。 将各种洁净的玻璃器皿如培养瓶、量筒、烧杯、吸管、玻璃棒、漏斗等，放在指定的位置。准备好蒸馏水或无离子水及瓶盖或封口膜、包纸、橡皮筋等。 称取规定量的琼脂和蔗糖，将琼脂置于精钢锅或者电饭煲中，加水至培养基最终容积的 3/4 或 1/2，随之加热并用玻璃棒进行搅拌使之溶解，注意防止煳锅底和溢出。琼脂必须完全溶化，以免造成浓度不均。 琼脂不能过多，不然会导致培养基太硬，含水太少，通气不良；反之，培养基太软，植物材料则难以固定。由于琼脂较难溶解，所以在制备培养基时，应首先加热溶解。 按母液顺序，根据不同母液的浓缩倍数移取规定的量（查看）。各母液移取量计算公式为： 母液移取量（ ml） = 待配制培养基体积（ ml ）/母液的扩大倍数 激素母液移取量（ ml）= 培养基所需的激素质量（ mg） / 母液浓度（ mg/ml）如配制 1L MS 培养基移取扩大 10 倍的大量元素母液为 100mL。 母液加完后，再经过计算加入所需要的植物生长调节剂。 在加入母液或生长调节剂时，应事先检查这些药品是否已经变色或产生沉淀，若出现这些现象就停止使用。加完后一并倒入已溶化的琼脂中。 加蒸馏水定容至培养基的最终容积。 pH 值调整。培养基的 pH 值（酸碱度）直接影响培养物对离子的吸收，所以过酸或过碱都 会影响植物的生长。此外，琼脂培养基的 pH 值还影响到其凝固程度，所以当培养基配制好以后，应随即进行 pH 值的调整（一般 pH 值为 5.6-6.0）。 最好是用酸度计测试，即快又准，如无此设备也可以用精密 pH 试纸（应在干燥容器中保存， 以免吸潮而失效）。若培养基偏酸就用 1mol/L 的氢氧化钠来调节，偏碱则用 1mol/L 的盐酸 来调节。 经高压蒸汽灭菌后，由于某些成分的分解（如蔗糖）或氧化，使培养基的 pH 值会降低（一 般会降低 0.2 左右）。有时玻璃皿质量较差，其中一部分物质溶解，也会影响酸度的变化，这些再调整培养基的 pH 值的时候都要考虑进去。 一般在比较成熟的情况下，会在培养基高压蒸汽灭菌前调高一定的 pH 值，以便适应灭菌后 pH 值下降的问题，具体调高多少可根据自身实验摸索。 培养基的分装。琼脂约在 40℃以下时凝固，因此配制好的培养基要趁热分装，分装时一般用烧杯、漏斗直接精选分注。若条件允许，用培养基灌装机来分注会更加方便。 分装时要掌握好分注量，多了即浪费又减小培养物的生长空间；少了又会因营养不足而影响 生长，一般以占培养容器 1/4 - 1/3 左右为宜，培养基在培养容器中的厚度约为 1.5cm。分装时要注意不要将培养基沾到管壁上，以免引起污染。分装后立即塞上棉塞或者盖上瓶盖或封好封口膜，并在培养瓶上贴标签或用记号笔在瓶壁上作好标注，然后进行灭菌。