组织学快制片技术.ppt

二、组织学制片技术的分类组织学制片技术包括普通制片方法和特殊制片方法。制片方法又分为切片法和非切片法两种。切片法分为石蜡切片、火棉胶切片、冰冻切片、等。非切片法分为铺片、涂片、分离片、磨片、整装片、超活体染色等。; 三、组织学制片步骤取材 固定 冲洗 脱水 透明 浸蜡 包埋 修块 切片 贴片 烤片 染色 封片 观察结果; （一）、组织取材1 动物的处死有麻醉放血处死法、有直接放血处死法。 （1）吸入麻醉法 、将浸透乙醚的棉花放入玻璃缸内,将动物放入玻璃缸内,盖上玻璃盖，观察动物麻醉情况，放血处死,此法用于小动物。 （2）注射麻醉法、用3%戊巴比妥钠按每公斤体重1—2ml静脉注射或腹腔注射，麻醉后 ;立即放血处死,此法用于大动物。 （3）直接处死法、用金属器械猛击动物的后脑部或直接断头放血处死,此法适合于小动物。 2 动物的选择动物的选择是组织切片取材的第一步,在组织学中以人的组织为理想，但人的组织不易得到，根据教学的需要,大都以动物的组织来代替。但有些动物的组织器官比人的组织更为典型，如：猪的肝脏、豚鼠胰腺、内耳、猫的肋间肌;显示运动终板，兔的皮下组织和肠系膜作活体染色较为理想 。 （1）猴：神经系统、循环系统、淋巴系统、内分泌系统、泌尿系统、雌雄生殖系统和特殊感官等。 （2）狗：呼吸系统、循环系统、泌尿系统、淋巴系统、内分泌系统、神经系统等。（3）猫：消化系统、泌尿系统、内分泌系统、神经系统、肌肉组织等。（4）兔：皮下组织、肠系膜、卵巢、肺、耳壳等。;（5）羊：心脏、膀胱、雌雄生殖系统等。（6）猪：肝脏、骨髓、脑垂体等。（7）豚鼠：胰腺、内耳、肾上腺等。 3 取材注意事项：（1）动物放血处死后立即取材，最好在心脏还在跳动时立即取材，马上投入固定液中，（2）切取组织的刀剪必须锋利，切分组织块时，不可来回切割。夹取组织时，镊子要轻，切勿挤压。以免损伤组织。（3）取材时确定部位和切???的方向。（4）组织块应力求小而薄,一般长为0.5厘米;宽为0.5厘米厚为0.2厘米,  （5）取材应注意清洁，组织块上如有血液、污物和粘液沾着，应用生理盐水洗涤后再入固定液。（二）固定 1 固定的目的 （1）能迅速阻止死后变化，防止组织的自容与腐败。 （2）使细胞内物质凝固成不溶性物质,如蛋白质、脂肪、酶等。; （3）使组织产生不同的折光率,染色后便于鉴别和观察。 （4）对组织有媒染作用，使不同组织成分对染料有不同的亲和力。 （5）能使组织硬化。 （6）能细胞各部分清晰。 2 固定的方法 （1）小块组织固定、从人体或动物取出组织，切从小块投入固定液中固定。 （2）局部注射固定、某些组织和器官其;固定液不易渗透或渗透较慢，渗透不均匀，还有些器官为保持外型或卷缩，可采取局部注射固定方法，固定4—6小时后，再将组织切成小块继续投入固定液中固定。 （3）整体注射固定、此法主要用于科研和大体解剖，亦可用于组织学教学制片。3 固定液固定液分为单纯固定液和混合固定液两种。 单纯固定液 （1）甲醛、它是一种还原剂，呈酸性,原液浓度为37%—40%，配成固定液的浓度;为4%，习惯上称为10%，配制时取甲醛原液10ml，加D.W或缓冲液至100ml,为甲醛固定液。甲醛渗透力强，固定均匀。但脱水后有较大收缩，在某些方法中要求中性甲醛，可在原装瓶内放入碳酸镁使其沉淀为2CM，pH为7.6，也可以加粉笔数根，可长期保持中性。加碳酸钙pH为6.5,固定后，可以直接进入脱水剂脱水，如固定时间较长，需在流水中冲洗24—48小时,否则影响染色效果。 （2）酒精、它是一种还愿剂，用于组织;固定以95%的浓度为宜，酒精固定后的组织细胞核着色不良，一般用于糖元的固定， （3）升汞、有称氯化汞，为剧毒药品，使用时特别注意，它与其它药物混合使用对细胞核和细胞质固定良好。 （4）苦味酸、为黄色结晶，干燥易燃烧、爆炸，通常加入蒸馏水制作饱和液保存，它的渗透力弱，一般不单独使用，与其它药物混合使用。 （5）冰醋酸、含量为99%，在低温时结成冰状，对染色质固定良好，所以在多种混;合固定中液都用它。 （6）重铬酸钾、水溶液呈弱酸性，它为强氧化剂，不能与酒精等还原剂混合，但与甲醛混合也不能保存过久一般在12—24小时失去作用，重铬酸钾固定组织穿透速度快。但必须流水冲洗。 混合固定液、上述某一种单纯固定液不能将组织内的各种成份保存下来，各种药物均有选择性，渗透能力也不同，收缩或膨胀也不相同，因此多配成混合固定液。;（1）Zenker氏液