组织学制留片技术9.ppt

1．切片标本：组织经固定、切片（包括冰冻切片、石蜡切片及火棉胶切片）染色、封固而制成的各种玻片标本。它为组织学中最常用的标本。;2．铺片标本：将肠系膜或皮下组织铺于载玻片上，经固定、染色、封固而制成的标本。;3．涂片标本：主要是将液态组织如血液、骨髓、痰液、腹水、精液等液体涂抹于载玻片上，经固定、染色制成的组织标本，以供观察细胞的形态与其微细结构。;4．磨片标本：不经脱钙及切片手续，而直接用手工在磨石上磨制成薄片，以便在显微镜下观察的骨、牙磨片标本。;5．分离标本：将极小组织块用化学药物的水溶液浸泡后，溶去其细胞间质，采用机械分离方法（如振荡、针拨等方式）使之分离成单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片上进行镜检。;6．压片标本：组织经化学药物软化及染色后，用盖片压封于载玻片上进行镜检的标本。如运动终板的制作??;7．整装标本：一种是将很小的动物或早期胚胎经固定、染色后，封固于载玻片上。另一种是将小动物、胚胎或病变器官经固定后，保存于固定液中瓶装供肉眼观察用。可了解胚体的表面立体形态特征及病变部位与周围组织的毗邻关系。;8．活体标本：在组织细胞生活状态下进行观察的标本，或生活状态下进行活体染色后制成的标本。;9．血管注射标本： 一种是将树脂类铸形剂经血管灌注后，用强酸或强碱腐蚀血管周围组织而制成的血管铸形标本，可瓶装供肉眼观察或进一步处理后作扫描电镜观察。另一种是将染料加明胶配制成染色液注入血管内，然后取材、固定、包埋、切片和封固所制成的组织切片标本。这类标本主要用于了解血管的走行及其与所支配组织或器官的相互关系。; 组织切片的制作方法有：石蜡切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、超薄切片（电镜标本）、树脂切片、碳蜡切片等。石蜡切片法是最常用的方法，本节将较详细讲授其制作步骤。 ; 组织切片制作方法的基本程序为： 取材→固定→脱水→透明→包埋→切片→染色→封固。;;（1）颈椎脱臼法 （2）断头法 （3）麻醉法 （4）空气栓塞法：;使细胞内蛋白质凝固，终止或抑制外源性和内源性酶活性，防止组织自溶；使组织成份转变为不溶性物质从而有利于保存。这就是固定的基本意义。;(1)组织块不宜太大，一般以厚度为2毫米，长度不超过0.5厘米*0.5厘米。 (2)固定液的量一般以组织块大小的30倍为宜，最好在固定组织的瓶底垫上脱脂棉或几层纱布以使固定液能从上下左右前后各方都能渗入组织块。 (3)固定的时间，一般以24小时为宜。; (4)后固定：柔软组织在新鲜时不易切成小块，往往采用重新固定法处理。 （5）特殊固定：神经组织以在活体动物灌流固定后再重新投入固定液为佳，有些组织如肺则采用由气管注射固定液后再投入固定液为好。;常用的固定液有： （1）10%福尔马林液：商品甲醛（36%—40%甲醛水溶液）配成固定液其浓度为3.6%—4%，也就是习惯上称为10%的福尔马林液。 （2）10%中性缓冲福尔马林液：商品甲醛10ml， 0. 1mol/L pH7.4 PBS 90ml。; （3）4%多聚甲醛磷酸缓冲液（pH7.4） （4）Bouin’s液：苦味酸饱和水溶液75份，甲醛25份，冰醋酸5份配制而成。 ;　　（1）灌注法（Irrigation method）自左心室插入主动脉，先以生理盐水冲冼血液后，注入固定液，30min后取材，置同一固定剂后固定。 （2）浸入法（Immersion method） 。; 材料固定后，药剂继续留在组织中，易使组织破坏，必须用水或酒精洗去。;1、目的 ：脱水与透明的目的在于为石蜡渗透至组织块内部以便进一步包埋做必要的准备。脱水必须从低浓度开始，逐渐转入高浓度脱水剂。另外脱水必须进行得很彻底。 2、常用脱水剂： （1）酒精： （2）丙酮： ;3、常用的透明剂有二甲苯、甲苯、氯仿等。 二甲苯：透明组织的能力强，但易使组织收缩和变脆，故在二甲苯中不宜搁置太久。 氯仿：其透明能力远比二甲苯慢，透明时间可以延长至24小时也无妨。 ;1． 目的：由于生物体的组织有各种硬度不同的成份，必须加石蜡等作支持物质渗入组织块内部，并将组织块包埋起来，然后用切片机以制作极薄的切片。 2． 种类：包埋物质目前广泛采用的除石蜡外，还有火棉胶、炭蜡、明胶以及环氧树脂、OTC(冰冻切片包埋剂）等。;商品石蜡 的处理： 浸蜡 ： 包埋：通常使用包埋盒。 ; 包埋通常使用组织包埋机、包埋盒及配套使用的不锈钢模具。把熔蜡倒入模具内，再用加热的弯曲钝头镊子夹取已经过浸蜡的组织块，使切面朝下平正地置放于模具底面的中央处，然后放上包埋盒，继续加满蜡，待包埋盒表面的 熔蜡凝固后，将其移入 加冰块的冷水中加速凝 固，包埋即告完成。 ;1; 石蜡切片机可分三个部分，一是安装切片刀的部分，有调节刀