第七章微生物生长和环境.pptVIP

Chapter 7微生物的生长与环境条件;掌握： 1、微生物生长的测定方式 2、细菌纯培养生长曲线各个时期的主要特点 3、物理、化学手段控制微生物生长的方法及原理 重点： 细菌纯培养生长曲线 难点： 利用细菌纯培养生长曲线的对数生长期计算代时;第一节 微生物生长的测定 ;二. 细菌群体生长的测定;一、获得纯培养的方法;稀释分离法 1. 稀释平皿分离法 2. 平皿划线分离法 单细胞挑取法 纯培养分离中选择性培养基的利用 富集培养的利用;1、稀释平皿分离法;涂布平皿法;2、平皿划线分离法;;稀释分离法 1. 稀释平皿分离法 2. 平皿划线分离法 单细胞挑取法 纯培养分离中选择性培养基的利用 富集培养的利用;选择性培养基的利用;没有一种培养基或一种培养条件能够满足自然界中一切生物生长的要求，在一定程度上所有的培养基都是选择性的;根据所要分离的菌种的特性选用培养基： ①分离真菌用马丁培养基，pH偏酸；分离放线菌用高氏1号，pH中性偏碱。 ②根据不同菌对化学试剂的敏感性：分离放线菌，培养基中加10%酚，抑制细菌、真菌；从土壤中分离真菌，加孟加拉红，抑制细菌生长。 ③根据分离对象的营养特征：分离能发酵纤维素的菌株，培养基以纤维素为唯一碳源。分离固氮菌，用无氮培养基。;二、细菌群体生长的测定; 细菌的生长和繁殖难以分开，因此，常以群体生长作为细菌生长的指标 细菌群体生长测定一般采用细胞数量和生物量两种方法;（一）细胞数量的测定;采用细菌计数板或血球计数板，在显微镜下对微生物数量进行直接计数（计算一定容积里样品中微生物的数量）。;不能区分死菌与活菌 不适于对运动细菌的计数 需要相对高的细菌浓度 个体小的细菌在显微镜下难以观察;2、比浊法;活菌数量的测定（间接计数法） 1、稀释平板测数法 2、最大概率法（MPN法） 3、薄膜过滤计数法;1、稀释平板测数法 以CFU(colony forming units)表示 ;倾注平板法;采用培养平板计数法要求操作熟练 、准确，否则难以得到正确的结果：;2、最大概率法;;测定细胞干重法 单位体积培养物中细胞物质的干重 含氮量测定法 微生物细胞中蛋白质的含量是比较稳定的，测出微生物细胞中的含N量后再换算出蛋白质的含量，可用凯氏定N法 。 蛋白质的含量=氮量×6.25 DNA含量的测定 ATP含量的测定;代谢活性法;将少量纯培养微生物置于一定容积的培养基中，经过培养生长，最后一次收获。; 批量培养是实验室常采用的方法，即细菌在一定体积的培养基中生长，经历了消长的生活周期 以少量的纯培养细菌接种有限的液体培养基，并在培养过程中定时取样测数，可以发现细菌群体的生长有一定的规律。若以时间为横坐标，以活菌数的对数为纵坐标，可以绘出一条类似于S形的曲线，该曲线称为细菌纯培养的生长曲线;菌数的对数; 在这个时期内,菌体体积增长较快,如巨大芽孢杆菌可以从3.4μm增长到9.1—19.8μm。细胞内原生质比较均匀一致，贮藏物质消耗，DNA含量提高，产生各种诱导酶，在这个时期的后阶段，菌体细胞逐步进入生理活跃期，少量菌体开始分裂，曲线稍有上升。 滞留期的长短，因菌种和培养条件不同而异，几分钟到几小时不等。不同微生物的适应期不同 ;对数期;在对数生长期内，细菌数目的增加是按指数级数增加的，即 20 →2 1 →22 →23 ……2n 这里的指数 n 为细菌分裂的次数或者增殖的代数，也就是一个细菌繁殖n代产生2n 个细菌 如果在对数期开始时间 t1的菌数为 x1，繁殖 n 代后到对数期后期t2的菌数为 x2，则x2 = x1· 2n;代时(Generation time, G)（即每增加一代所需要的时间）: G =（t2 - t1）/ n x2 = x1· 2n lgx2 = lgx1 + nlg2 n =（lgx2 - lgx1）/ lg2 n = 3.3 · lg (x2 / x1 ) G =[t2 - t1 ] / [3.3 · lg (x2 /x1)] ;例如：在一细菌培养液中第一次测得的细菌数为 104 /ml，经过培养 4 h后，又测得菌液中的细菌数为 108 /ml，求此菌的世代时间和在此时间内繁殖的代数 根据公式：G = [t2 - t1] / [3.3 · lg (x2 /x1)] t2 - t1 = （4 - 0）× 60 min = 240 min