药敏试验 扩散法 操作方法.ppt

药敏试验（扩散法）操作方法 河南康星畜禽疫病 诊断中心 马长宇内容 : ? 一、药物敏感试验的目的与意义 ? 二、常用的药敏测定方法 ? 三、试验准备及用品 ? 四、药敏试验操作步骤 ? 五、结果观察 ? 六、影响药敏结果的因素 一、概念 ? 抗菌药物敏感性试验（ AST ，简称药敏试验）：用于测 试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。 ? （ 1 ） MIC ：体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度，临 床医师可以根据 MIC 确定药物剂量。通常达到稳态的血 药峰浓度（ Css ） max 应为 MIC 的 4-8 倍，重症感染以大于 8 倍为妥。 ? （ 2 ）为方便临床给药，根据 MIC 提供一个定性的结果是 必要的。临床医师根据敏感、中介、耐药的提示结合 MIC 可以方便地制定用药方案。 敏感（ S ） ：表示该药物对细菌的 MIC 值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓 度或组织浓度 4-8 倍，可以用常规剂量治愈。 中介（ I ） ：表示该药物对细菌的 MIC 值接近于常规剂量给药后的血药浓度 或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的 感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。 耐药（ R ） ：表示该药物对细菌的 MIC 值等于或高于常规剂量下药物的血液 浓度或组织浓度，细菌不能被该种药物抑制。 意义： ? 1 、检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理 用药。避免盲目用药、滥用药、大剂量用药。 ? 2 、监测耐药性，分析耐药菌变迁，了解某一地区致病 菌的耐药变迁、流行病学调查及监控，控制和预防耐药 菌株的流行 ? 3 、为经验用药提供所选药物的参考依据，可预测抗菌 治疗的效果。“敏感”治疗可能有效；“耐药” 肯定 失败 ? 4 、新抗菌药的研究 以下情况不需进行药敏测定： ? 标本污染细菌，非致病菌引起 ? 已知某些抗菌药对某菌有良好的抗菌作用且很少 有耐药菌产生 ? 已知细菌全部耐药的药物 ? 对营养要求高而不易生长的细菌 二、常用的药敏测定方法 ? 1 、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等 。 纸片法 手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基 上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上 广泛使用此法。 定性 ? 2 、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量） 通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断 其最低抑菌浓度（ MIC ）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏 试验的方法。 定量 ? 3 、 E 测定法（ E test ）： 与扩散法相似，但药物包被于长塑料条上，能够精确测定 MIC 值。适于一些特殊病原菌的药敏测试，但价格较为昂贵。 ? 4 、全自动药敏仪法： 三、试验准备及用品 ? 药品（单品药、药厂的成品药、中药）、恒温培养箱、药敏片、 培养基、平皿（直径 90mm ）、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器（文 具店有售）、 ? 0.5 麦氏比浊管配制方法： 0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2.2H2O) 0.5ml 0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml 将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效 期为 6 个月。 1 、培养基 MH 肉汤（ MHB ） Mueller-Hinton Broth 用途：用于抗生素敏感试验 配方：（ g/L ） 牛肉粉 2.0 可溶性淀粉 1.5 酸水解酪蛋白 17.5 pH 值 7.4 ± 0.2 25 ℃ 原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提 供氮源、维生素和氨基酸；可溶 性淀粉吸收有毒的代谢产物。 用法：称取本品 21.0g, 加热溶解 于 1000ml 蒸馏水中 ,121 ℃高压灭 菌 15 分钟 , 备用。 MH 琼脂（ MHA ） Mueller-Hinton Agar 用途：用于抗生素敏感试验 配方：（ g/L ） 牛肉粉 6.0 可溶性淀粉 1.5 酸水解酪蛋白 17.5 琼脂 17 PH 值 7.3 ± 0.1 25 ℃ 原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、 维生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒 的代谢产物；琼脂是培养基的凝固剂。 用 法 ： 称 取 本 品 42.0g, 加 热 溶 解 于 1000ml 蒸馏水中 ,121 ℃高压灭菌 15 分钟 , 待冷至 50 ℃，倾入无菌平皿 , 备用。 ? 1 、是兼 性厌氧菌 和需氧菌 药敏试验 标准培养 基 ? 2 、如营 养要求高 可加 0.5% 羊血。 ? 3 、平板 直径为 9cm 。 ? 4 、琼脂 板厚度 4mm 。误 差± 1mm 。 ? 5 、4℃ 保存 7 天。 营养肉汤（ NB ） Nutrient Broth 用途