试验一质粒dna的提取及检测.ppt

实验一 质粒 DNA 的提取及检测 质 粒 （ plasmid ） ? 是染色体外小型（ 1-200kb ）的共价、闭合、 环状的双链 DNA 分子（ cccDNA ），能自主复 制并能稳定遗传的遗传因子。 ? 常常编码一些对宿主有利的酶的基因，这些基 因的表型包括抗生素抗性、产生抗生素、限制 酶、修饰酶等 ? 质粒的复制：严紧型复制（ 1 ~ n 个） 松弛型复制（ 20 个以上） 常用的质粒载体 ? 是通过 DNA 重组技术构建而成的。 pUC18, pUC19 质粒提取的思路 ? 质粒的特性：共价、闭合、环状的小分子量 DNA ? 要去除的物质： ? 蛋白 ? 基因组 DNA ? 脂类及小分子杂质 ? RNA 第一部分 质粒 DNA 的提取 一．目的 ? 了解提取质粒的原理。 ? 学习和掌握质粒提取的方法和技术。 ? 细菌的生长和质粒的扩增 ? 菌体的收集裂解及质粒 DNA 的分离 ? 质粒 DNA 的纯化 二．原理 ? 碱变性法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在 拓扑学上的差异： ? 在 pH 12.0-12.6 碱性环境中，线性的大分子量细菌染色体 DNA 变性，而共价闭环质粒 DNA 仍为自然状态