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现代生化技术结课作业 闫志远 2011506055 生命科学学院生物技术11级2班 现代生化技术课程作业 生物化学是研究生物体的物质组成和生命过程屮的化学变化的一 门科学。或者说生物化学是研究生命现象中的物质基础和化学变化的 一门科学。更简单地说丰物化学就是研究纶命现象的化学本质。牛:物 化学就是生命的化学。 生物化学研究的主要冃的是从分子水平了解活细胞相关的所有化 学进程。生物化学的研究对象是生物分子的组成成分如碳、氢、氧、 氮、磷等化学元素以及水和无机盐代谢、生物大分子如DNA、RNA、 蛋白质、多糖及脂类的结构、功能、结构与功能的关系以及生物大分 子的代谢和相互作用。 生物化学研究技术：1?、分离技术：沉淀、吸附、膜分离（过滤、 透析等）、离心、层析、电泳等；2、分析检测技术：电泳、层析、光 谱、质谱、电化学技术、分子标记等。3、分子生物学研究技术：基 因重组、分子杂交、PCR与反转录、核酸测序、免疫技术、生物芯片 等等。生物大分子的制备过程包括选材、细胞破碎和细胞器分离、生 物大分子提取纯化、以及样品浓缩干燥和储存等。 层析技术是利用混合物屮各组分的物理化学性质（分子的形状和 大小、分子极性等）的不同，使各组分以不同程度分布在固定相和流 动相中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，而达到 分离的技术。层析系统都由两个相组成：1、固定相，它或者是固体 物质或者是固定于固体物质上的成分；固定相是层析的一个基质。它 可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可以是液体 物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化 合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。2、流动相，即可以流动 的物质。在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移 动的液体、气体等，都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层 层析时称为展层剂。主要有吸附层析法、分配层析法、离子交换层析 法、凝胶层析法、亲和层析法。 离心技术是借助于离心机旋转所产生的离心力，根据物质颗粒的 沉降系数、质量、密度及浮力等因子的不同，而使物质分离的分离分 析技术。随着生物化学、分子生物学和生物工程的发展，离心分离技 术已在科研和生产中广泛应用O每个生物化学和分子生物学实验室都 要装备多种型式的离心机。离心技术主要用于各种生物样品的分离和 制备，生物样品悬浮液在高速旋转下，由于巨大的离心力作用，使悬 浮的微小颗粒（细胞器、生物大分子的沉淀等）以一定的速度沉降， 从而与溶液得以分离，而沉降速度取决于颗粒的质量、大小、密度和 形状等。离心机一般由离心机丄机，转头，离心管三部分组成。根据 转速的高低把离心机分为三种：低速离心机；高速离心机；超速离心 机。据离心机的性能可分为：分析型，制备型和分析制备型。离心分 离是制备生物样品广泛应用的重要手段。如分离活体生物、细胞器、 生物大分子、小分子聚合物等。对于生物样殆的离心分离方法，主要 是根据样品的不同来源和不同性质采取不同的离心方法。目前常用离 心方法有：1、沉淀离心；2、差速离心;3、连续流离心4、其他方法。 标准PCR反应过程，反应体系1、模板DNA;2、上游引物（20 u M);3、下游引物(20 nM)； 4、dNTPs (各 2. 5mM) ； 5、Taq DNA 聚合 酶；6、MgC12 (25mM)； 7、10XPCR Buffer； 8、灭菌蒸馆水。基因 重组是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组 合，形成新DNA分子的过程。发生在生物体内的基因重组包括同源重 组、位点特异重组、转座作用和异常重组四大类，是生物遗传变异的 一种机制。基因重组技术可概括为：分、切、连、转、选。基因T程 技术的两个最基本的特点是分子水平上的操作和细胞水平上的表达， 而分子水平上的操作即是体外重组的过程，实际上是利用工具酶对 DNA分子进行〃外科手术〃。 分子杂交技术有液相杂交、固相朵交、原位杂交、基因芯片。DNA 测序是在核酸酶学和牛:物化学的基础上，创立并发展起来的…门重要 的DNA技术学。这门技术对于从分子水平上研究基因的结构与功能的 关系，以及克隆DNA片段的操作方面，都具有十分重要的实用价值。 DNA测序的两种方法：链终止法(the chain termination method) 单链DNA分子的序列由与之互补的多核背酸链的酶促合成来判定，互 补链在某一特定的核背酸位置终止。化学降解法(chemical degradation method)双链DNA分子被化学物质修饰后，在特定核昔 酸位置被切开，从而确定DNA分子的序列。非常规DNA测序：1、光 点测序(pyrosequencing)又叫焦磷酸测序。链合成反应体系中没有 ddNTP,各种dNTP分别加入，当dNTP连接到