生物化学基础 酶的应用 酶的应用.pptxVIP

酶的制备酶的分离纯化步骤1.选材：选用酶含量高的材料 工业上大多采用微生物发酵的方法来获得大量酶制剂。优点：不受气候、地理条件的限制，动、植物体内的酶大多可从微生物体内找到，微生物繁殖快，产酶量也丰富。还可以通过选育菌种来提高酶的产量和用廉价原料大量生产。2.破碎细胞：机械破壁，化学破壁，酶破壁，冻融破壁等生物体所产生的酶有胞内酶和胞外酶之分，所以在处理方法上有所不同。如果是胞内酶则需要先用捣碎、砂磨、冻融或自溶等方法将细胞破坏，然后再用适当的盐溶液或缓冲液把酶提取出来——抽提如果是胞外酶，则无需破坏细胞的手续，而直接用体液如唾液、胃液、乳汁或微生物的发酵液进行纯化 3.抽提: 用适当的盐溶液或缓冲液把酶提取出来4.分离及纯化 一些常用的分离纯化酶的方法：（1）盐析法 最常用的盐是硫酸铵、氯化钠和硫酸钠等 （2）有机溶剂沉淀法 乙醇、丙酮等能与水互溶的有机溶剂，在不同的浓度下能沉淀不同的蛋白质，因此可用来纯化酶。此法分辨能力高，提纯效果好。 但高浓度的有机溶剂常引起酶活力的丧失,同时整个操作过程都应该严格控制在低温进行 酶的制备方法基本上与制备蛋白质的方法相同，所需特别注意者，酶是有生物活性的蛋白质，在制备过程中应尽最大可能避免对酶活力有损的措施。 酶分离纯化的一般原则所有蛋白质分离纯化的方法都适合酶，但操作在 低温下进行。特别注意酶活性的保护，避免一切 能引起蛋白变性的因素每一步都要进行酶活力的测定，跟踪酶的去向，评价纯化方法。