1基因组dna的提取及电泳鉴定.ppt

分子生物学实验 1 、 欢迎大家参加分生实验的学习； 2 、 学习分生实验的重要性； 3 、 守纪律，听老师安排，穿白衣； 4 、 每组做一份实验 4 、 本课件原则上禁止拷贝，要作好记录 ; 5 、 关于课间休息和上课时间 每天实验结束应主动整理实验台。值日安排。 实验课考试 1. 最后 2 学时进行实验课考试 2. 开卷 , 但不许抄袭其它同学试卷。 内容为实验课学习内容。 一、加样器的使用及注意事项 1 、 用途 2 、 如何使用？ 2.1 根据取样量，选择合适的加样器。 5ul 、 50ul 、 500ul ，应选择哪个加样器 ? 顶部标有加样器的 最大量程 ， 分别为： 20ul: 0.5 ~ 20 ? l 100/200ul: 20 ~ 100/200 ? l 1000ul: 200ul ~ 1000 ? l 实验仪器的使用及注意事项 练习：加样器读数为 100 ，实际体积各为多少 ? 2.2 如何调节？ (1) 首先观察目前读数 , 假设为 050: 1000 ? l: 500 ? l 100/200 ? l: 50 ? l 20 ? l ： 5 ? l (2) 顺时针调节 --- 读数变小 逆时针调节 --- 读数变大 (3) 注意：调节前加样器读数正处于最大量程或最小 量程时，如果向错误方向调节，马上会超出量程，将 会损害加样器的精度。 2.3 加样器使用步骤 ( 示教及学生练习 ) ： 1 ）选择加样器 , 观察读数 , 调节读数，吸头的安装要紧密。 不要用手直接拿吸头，安上吸头后一定要再固定一下。 2 ）吸取液体前，先打到 第一挡 。 3 ）将吸头插入液面下适当深度， 过深可能会腐蚀加样器 , 过浅可能会吸入空气。 4 ） 缓慢 松开拇指 , 吸取液体。松开过快，液体上冲会腐蚀加样器 ; 完全放开拇指后，停留约半秒钟 , 急于离开液面，容易吸入空气。 5 ）抬起加样器 , 估计体积是否正确 , 将外壁液体用容器口引流回去 6 ） ( 吸头内有液体时，不能将加样器倒置或平放，以防液体倒流损 坏加样器！ ), 贴容器内壁，将液体 匀速 打出，加样器推到 第二挡 。 观察吸头内液体是否完全打出并立即弃于废物盒内 . 1 、打开电源 2 、离心管中的液体为 2/3, 盖紧盖子 , 防止离心机被腐蚀。 二、离心机的使用注意事项 1 代表转速盘上方的数据， 2 代表下方的数据。 3 、样品配平 , 对称 放入离心机 ( 管的连接 处朝外 ). 4 、设定离心时间 ( 如 设定 2 分钟，可定时多 点时间，再用手表记 时 ) 。 5 、 统一离心 ，逐渐 升到要求转速。 实验一、 真核细胞基因组 DNA 的 提取、酶切及电泳 实验目的 1. 掌握 人外周血基因组 DNA 的 提取技术 。 2. 学习 酶切 技术 3. 学习 DNA 琼脂糖凝胶 电泳 的原理和技术。 第一部分 ：裂解血细胞、 蛋白酶 k 消化 第二部分 : 酚氯仿抽提、 乙醇沉淀 第三部分： 酶切、 DNA 电泳 实验内容 （到 8 ： 30~8:40 ） 1 ）取 0.3ml 抗凝血置于 1.5ml Eppendorf 管中 . 2 ）加入 1ml STMT 溶液，充分混匀，静置 5min ，使其溶血。 3 ） 9,000rpm, 离心 3 分钟 ( 统一离心 ) 。 4 ） 弃上清。 弹管底重悬 沉淀 。 注意 : 离心时离心机内样品要平衡 实验步骤 实验第一部分：裂解红细胞、蛋白酶 K 消化 加样器使用提示： （ 1 ）吸头的安装要紧密。 （ 2 ）打到 第一挡 ，将吸头插入液面下适 当深度（ 3 ）缓慢松开拇指，吸取液体。拇指完全放开后，吸头在 液面下停留