常用HPV检测方法的分析分解.ppt

常用 HPV 检测方法的分析 HPV 检测的意义 ? HPV 感染与 CIN 和宫颈癌变有着密切的 关系 ? HPV 的检测可能对宫颈癌的预后有预测 作用 ? HPV 检测对科学研究的价值 常用检测方法 1 ．细胞学检查； 2. 组织学检查； 3 ．感染组织中 HPV 蛋白的检测； 4. HPV 感染的血清学检查； 5. HPV 基因组检测 . 细胞学检查 ? ? ? ? 传统巴氏涂片（ CV ） 液基薄层细胞学技术 (TCT) 自动细胞学检测系统 test ，又称 LCT 计算机辅助细胞检测系统（ CCT ）， 优点与问题 优点： 操作简单，价格低廉，适宜作初步筛查； 缺点： 凹空细胞是 HPV 感染的主要形态学改变， 但由于其他病毒感染及人为因素均有可能造成细 胞内出现空泡或凹空样变，而且细胞学检查易受 取材、染色及细胞病理医生的主观判断等因素的 影响，因此应用细胞病理学检测 HPV 存在灵敏 度低、特异性差、假阴性率和假阳性率高、不能 对 HPV 进行分型 . 组织学检查； ? 肉眼观察； ? 阴道镜观察； ? 组织检查； 优点与问题 优点： 操作简单，价格低廉，适宜作初步 筛查； 缺点：准确率低，人员素质要求高，病人 痛苦程度大。 ? 针对 HPV 抗原，主要是衣壳蛋白制备抗体，通 过免疫学方法进行检测。 ELISA ，免疫沉淀法 等。 感染组织中 HPV 蛋白的检测 优点与问题 ? 优点：原理明确，操作相对简单 ? 缺点：由于 HPV 至今尚不能在体外培养， 且其免疫原性较弱，故血清学方法检测 灵敏度较低。 HPV 感染的血清学检查 ? 检测人体血清中是否存在有针对 HPV 产 生的抗体，通过免疫学方法进行检测。 优点与问题 ? 优点：原理明确，操作相对简单 ? 缺点：血清学检测的对象是抗原和抗体， 由于人体对 HPV 产生免疫应答有一定的 迟滞性，所以血清学检测对无免疫应答 者和 HPV 潜伏期感染者会产生漏检。 ? PCR 类检测方法 ? Southern 杂交法 ? 原位杂交 ? 杂交捕获法 HPV 基因组检测 PCR 类检测方法 ? 优点：该方法灵敏度高， ? 缺点：是容易发生样品间的交叉污染， 从而导致假阳性率高。另外利用该方法 进行 HPV 分型操作比较烦琐。 Southern 杂交法 ? 优点：该方法灵敏度及特异性均高，适 ? 用于 HPV 分型、 HPV-DNA 分子质量鉴定、 基因组酶切图谱建立及物理状态研究等。 缺点：其操作麻烦、耗时、费用高，且 必须应用新鲜组织标本，故不宜大规模 临床使用。 ? 该法利用 HPV 探针与组织中的 HPV- DNA 杂交，首先将探针和组织中的双链 HPV-DNA 变性为单链，然后使探针与组 织杂交 . ? 优点：利于病理学分析 ? 缺点：杂交链的稳定性不高，在杂交过 程中，部分探针单链复性，使杂交率降 低，影响 HPV-DNA 的检出率。 原位杂交 杂交捕获法 杂交捕获 (hybridcapturesystem ， HCS) 实验是美国 Digene 公司新发展的一种检测 HPV DNA 的技术，其 原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的 检测。 基本实验步骤如下： 1. 样本 DNA 双链被释放并分解为核苷酸单链 ; 2. DNA 单链与 RNA 探针结合为 RNA － DNA 杂交体 ; 3. 特异性抗体将 RNA － DNA 杂交体固定在试管壁 或微孔壁上 ; 4. 结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与 RNA － DNA 杂交体结合 , 使信号放大 ; 5. 碱性磷酸酶使酶底物发光 , 判读光的强弱可确定碱 性磷酸酶的含量 , 从而确定 RNA － DNA 杂交体的含量。 ? 杂交捕获一代（ HC- Ⅰ ) 试验可检测 9 种 高危型 HPV , 包括 16 、 18 、 31 、 33 、 35 、 45 、 51 、 52 和 56 。所用的反应载体是 试管； ? 杂交捕获二代试验 (HC －Ⅱ ) 原来的试管 法改为 96 孔平板法，能同时检测 13 种高 危型 HP