牛膝甾酮类成分的提取分离和胆碱酯酶抑制作用研究.docxVIP

牛膝甾酮类成分的提取分离和胆碱酯酶抑制作用研究 牛膝（ Radix Achyranthis Bidentatae ）为苋科植物牛膝（ Achyranthes bidentata BI. ）的干燥根 , 又名百倍、牛茎、怀牛膝等 , 是我国传统中药 , 含有糖 类、皂苷、甾酮、黄酮、生物碱和香豆素等多种化学成分。甾酮是其有效成分之 一。 本论文对牛膝总甾酮的提取新方法 , 总甾酮中主要甾酮成分的分离、纯化与 结构鉴定 , 总甾酮和主要甾酮成分的含量测定、代谢动力学及胆碱酯酶抑制作用 进行了研究 , 结果如下 : 1. 牛膝总甾酮提取新方法研究。 目前牛膝甾酮类成分的 提取多采用有机溶剂回流、渗漉等方法 , 使用有机溶剂 , 生产应用有一定局限性。 本文采用水煮提取 , 大孔吸附树脂分离富集牛膝总甾酮 , 对水煮方法的工艺 条件进行了筛选。结果表明 : 水煮方法提取牛膝总甾酮的最佳工艺条件为 :35 倍 量水 , 在 80sup1/sup00℃下提取 2 次, 每次 2h, 在 pH6 左右吸附 , 吸附流速 1.2BV（BV:树脂柱床体积） /min, 用体积分数 85%的乙醇 2BV 洗脱 , 洗脱流速 0.4BV/min 。 在最佳提取工艺条件下 , 总甾酮提取率约 0.68%, 蜕皮甾酮提取率约 0.09%, 与甲醇、乙醇回流提取比较 , 总甾酮、蜕皮甾酮的提取率相近。说明水煮提取 , 大孔吸附树脂分离富集牛膝总甾酮是一种代替有机溶剂提取牛膝总甾酮的理想 方法。 牛膝总甾酮中主要甾酮成分的分离、纯化与结构确证。采用不同薄层色 谱分析 , 发现水煮提取工艺提取得到的总甾酮提取物 TLC 图谱上有一强色斑 , 对 该斑点所在部分通过硅胶柱层析和制备 HPLC分离、纯化 , 得到一个单体化合物。 经过与标准物质对照和波谱分析 , 确证该成分为蜕皮甾酮（ ecdysterone ）。 说明蜕皮甾酮是牛膝水煮工艺得到的总甾酮提取物的主要甾酮成分。 含量测定方法研究。建立了牛膝总甾酮和总甾酮中主要甾酮成分蜕皮甾酮的含量测定方法。 分光光度法测定牛膝总甾酮 , 在 100.4sup3/sup01.2 μ g/ml 范围内 , 总甾酮回归方程为 :A=327.1C×10sup-5/sup-0.085,r=0.9983, 线形关系良 好 ;HPLC 法测定总甾酮中主要甾酮成分蜕皮甾酮 , 在 0.406sup7/sup.308 g/ml 范围内 , 蜕皮甾酮回归方程为 :y=1.02751 × 10sup6/supx+158195,r=0.9996, 线形关系良好。结果表明 , 分光光度法测定 牛膝总甾酮和 HPLC 法测定蜕皮甾酮均简单方便 , 稳定性较好 , 方法可行。 牛膝总甾酮的代谢动力学研究。 采用 HPLC法 , 以牛膝总甾酮中主要甾酮成分蜕皮甾酮的含量为指标 , 研究。