玉米苗期抗冻生理响应及其转录组调控分析.docxVIP

玉米苗期抗冻生理响应及其转录组调控分析 随着温室气体排放增加 , 全球气候变暖导致极端天气事件发生频率明显增加 , 各种极端气候事件 , 如强寒潮、干旱和洪涝灾害等对农业生产造成了严重影响。 玉米是世界上最重要的粮食作物、饲用作物和能源作物之一。 而且由于起源于热带地区 , 玉米是典型喜温喜光的 C4 植物 , 对温度条件要求 较高 , 易受低温冷 ( 冻) 害的影响。在我国玉米生产中 , 春季和秋季的霜冻对玉米产 量易造成严重影响 , 尤其是对北方春播玉米区和西北灌溉玉米区 , 而且春季霜冻 的频次要高于秋季霜冻。 东北地区是我国玉米的主产区 , 而黑龙江省玉米常年种植面积已达到粮食作 物总面积的一半以上 , 为我国玉米播种面积最大的省份。近年来由于玉米需求的 刚性增长和玉米种植比较效益的提高 , 黑龙江省玉米种植区域已经发展到第 6 积 温带 , 玉米跨区种植的情况非常严重。 与此同时 , 近年来黑龙江省春季常有雨雪冰冻天气 , 玉米播种期易遇倒春寒 而推迟 , 直接影响玉米的正常播种 , 而且玉米幼苗期也易遭受倒春寒而出现冻害 损伤 , 影响玉米的正常生长 , 并最终造成减产。因此 , 开展玉米苗期抗冻性研究 , 筛选玉米抗冻种质资源 , 探究玉米苗期抗冻性生理生化机制 , 挖掘玉米在低温胁 迫下的抗冻基因 , 进而开展玉米抗冻性分子标记辅助育种等相关方面的研究 , 对 于解决黑龙江省玉米冷 ( 冻) 害问题具有重要而深远的理论和实践意义。 本研究利用 30 份黑龙江省常用玉米自交系 , 开展了玉米苗期抗冻性鉴定及 相关生理指标测定 , 同时结合转录组测序技术 , 对具有不同抗冻性的玉米自交系 苗期冻害胁迫响应基因及相关代谢通路进行了比较分析 , 研究结果如下 : 一、玉米 苗期抗冻性的高效鉴定方法本研究选取三叶一心期的玉米自交系幼苗放置于 -1 ℃ 的培养箱中分别进行 1h、3h 和 5h 的冻害处理 , 之后放置于正常培养条件的培养 箱中恢复 3 天,3 天之后统计幼苗存活率 , 以幼苗存活率来作为抗冻性的测量指标。 结果显示冻害胁迫处理 3 小时的幼苗存活率从 5.01%到 97.3%不等 , 呈现正态分布 , 能够有效的区分不同自交系的抗冻性 , 因此将冻害胁迫时间 3 小时作为有效鉴定 玉米苗期自交系抗冻性的处理时间。 并且筛选出两份极端自交系用于后续研究 , 其中 , 自交系 KR701在冻害处理 3 小时之后的幼苗存活率为 97.3%, 作为抗冻自交系 ;Hei8834 在冻害处理 3 小时之 后的幼苗存活率为 5.01%, 作为冻害敏感自交系。二、冻害胁迫下玉米苗期生理 机制分析 Hei8834 在冻害处理之后表现出明显的叶片萎蔫、失绿 , 台盼蓝染色后 显微观察也发现冻害处理之后 Hei8834 的叶片气孔张开并呈现深蓝色 , 说明其叶 片受冻害损伤严重。 同时 , 冻害处理后 ,Hei8834 的相对电导率在 0.5 小时和 1 小时分别为 0.13 0.87, 表明 Hei8834 在冻害处理 0.5 小时到 1 小时之间冻害损伤明显加剧 ; 同 时超氧化物歧化酶活性在冻害处理后 1 小时达到最高值 57.3 U/mg, 之后便开始下降 ; 过氧化物酶活性在冻害处理后 0.5 小时达到最大值 53.7 U/mg,之后也呈现下降趋势 ; 可溶性蛋白和可溶性糖含量都是在冻害处理之后一直缓慢升高。 KR701 的相对电导率在冻害处理之后一直维持 0.2 以下 ; 超氧化物歧化酶活性在冻害处 理之后上升趋势高于 Hei8834, 而且在 2 小时达到最高值 80.8, 之后略有降低 ; 过 氧化物酶活性在冻害处理之后一直处于上升趋势 ; 可溶性蛋白含量在冻害处理之 后也是上升趋势 ; 可溶性糖含量在冻害处理之后也是一直升高 , 直到 2 小时之后 维持相对稳定水平 , 并有下降趋势。 因此 , 冻害敏感自交系 Hei8834 在冻害处理 1 小时之后 , 冻害损伤明显 , 冻害 抵抗机制已失效 ; 而抗冻自交系 KR701在冻害处理 3 小时以内 , 冻害损伤较小 , 冻 害抵抗机制有效的保护了细胞免于冻害损伤 , 但是在 2 小时到 3 小时之间 , 有些生 理指标 ( 超氧化物歧化酶活性和可溶性糖 ) 已经开始略微呈现下降趋势 , 暗示冻害 处理时间如再延长 , 抗冻自交系 KR701的抗冻机制也不能有效抵抗冻害胁迫。 三、 不同抗冻性玉米自交系幼苗冻害胁迫前后的转录组测序分析对这两份极端材料 在幼苗期冻害处理之前和冻害处理之后进行转录组测序 , 共得到大约 154.4 百万 长度为 101 bp 的序列 , 其中 78.84%(121.8 百万 ) 的序列能比对在玉米参考基因组 Z