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精品文档 精品文档 PAGE PAGE #欢迎。下载 精品文档 精品文档 2 2欢迎下载 实验方案 【实验题目】： 土壤中细菌的分离纯化实验 【实验设计思想】： 细菌是具有很高实用价值的一类微生物 , 世界各国对其研究与资源开发极 为重视 . 目前, 国内有关细菌的区系调查及资源开发虽然有一些报道 , 但对不 同作物根际细菌的研究很少 . 甘肃天水麦积山海拔 1742m, 属黄土高原潮湿区 , 植物生长土壤区有机质含量丰富 , 本次实验将以该地区的落叶松、马尾松、白岩 松、野豌豆等作物生长地区的土壤为材料 , 分离鉴定其中的细菌 , 探讨不同作物 根际土壤中细菌分布数量及种类的差异 , 并且分析每一种菌种在植物生长过程 中所起的作用，最后以此为依据来推断麦积山大片地区内土壤中微生物的分布丰 富情况和它们对植物生长作出的巨大贡献 . 【实验目的】： 学会培养基最基本的制备方法。 学会最基本的微生物灭菌、接种等基本操作过程。 2. 掌握最基本的分离、纯化微生物的一系列操作操作。 【试验方法】： 取天水麦积山不同植物根部的土壤作为土样， 通过对其土壤中微生物的一系列培 养、分离、筛选最终分离出细菌得菌株，并稀释平板菌落计数法进行数量测定 四．实验原理 : 1. 菌种来源：由于各种细菌对营养物质需求不同， 在不同地方采样对选取所要的 细菌含量和其它杂菌含量的多少直接有关， 所以选择微生物含量有可能丰富的土 壤（天水麦积山植物根区）中采样。 2.培养基的选取： 为了使所要的细菌能很好的生长， 其它微生物生长受到一定的 抑制，要用选择培养基。还要把细菌与其他微生物相区别，还要用鉴别培养基。 为了达到既是选择培养基又是鉴别培养基，选取牛肉膏蛋白胨培养基。 培养及分离纯化：通过涂布培养法、平板划线法等方法达到分离纯化的目的。 保藏：通过分离纯化得到的菌种， 接种与斜面培养基上， 到一定时间后进行传 代培养保藏，使其不死亡、减少突变所引起的生物学性状的改变。 通过形态与染色鉴定：由于各种微生物有其特定的菌落形态特征和单细胞形态 特征，可通过这些形态进行鉴定。还由于细胞壁组成不同可进行鉴别染色法进行 鉴定，也可用产生不产生芽抱进行芽抱染色。 通过以上方法可对所分离纯化的菌 种进行初步的鉴定。 通过生理生化反应进行鉴定：各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异， 如 表现在对对大分子糖类和蛋白质的分解能力，以及分解代谢的最终产物的不同， 反映出他们有不同的酶系。我们在实验室允许的条件下做了糖类发酵与氧化、是 否能产生过氧化氢酶以及是否含有细胞色素氧化酶等生理生化试验， 进行再次鉴 ^定。 五【?实验材料】： 器材：玻璃烧杯、天平、搪瓷烧杯、三角瓶、量筒、漏斗、试管、培养皿、吸 管、培养基分装器、电炉、接种环、移液枪、 PH试纸(PH5.4— 9)、牛角匙、牛 皮纸、棉花、纱绳、高压蒸汽灭菌锅等。 牛肉膏、蛋白胨、NaCI、1mol/LNaCI、1mol/LHCI。 六?实验步骤： 配置牛肉膏蛋白胨培养基: .配方及其配量： 牛肉膏 0.3g， 蛋白胨 1g NaCl 0.5g, 琼脂粉 1.5g 水 100ml 注：PH7.2— 7.4，每份如此，根据需要可改变量进行配置。 .称取药品：按培养及配方与配量分别称取药品， 取少于总量的水于烧杯中， 将各个培养及成分(琼脂除外)逐一加入水中待溶。 .加热溶解：将玻璃被放在石棉网上(搪瓷烧杯可直接用文火加热) ，用文 火加热并不断搅拌，促使各药品快速溶解，然后补充水分之所需培养基的量。 调节PH值：初配好的牛肉膏蛋白胨培养液是微酸性的， 故需用1mol/LNaOH 调PH至7.2-7.4。为避免调解时过碱，应缓慢加入 NaOH液，即要边滴加NaOH 边搅匀培养液，然后用PH试纸侧其酸碱度值。检测培养基的 pH，若pH偏酸， 可滴加1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用 pH试纸检测，直至达到所需 pH 范围。若偏碱，则用 1mol/LHCl 进行调节。 pH 的调节通常放在加琼脂之前。应注意 pH 值不要调过 头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度 . . 过滤: 液体培养基可用滤纸过滤， 固体培养基可用 4 层纱布趁热过滤， 以 利结果的观察。但是供一般使用的培养基．此步可省略 分装: 披实验要求， 可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。 分装时可用三 角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的 1 ／5，灭菌后制成斜面。 分装入三角瓶内 以不超过其容积内一半为宜。半固体培养基以试管高度的 1/4 为宜．灭菌后垂 直待凝。 . 加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花 (非脱脂棉 )制作的棉塞，棉塞 的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙