实验七血红蛋白文本资料.docxVIP

实验七 脱辅基血红蛋白的制备和重组 一、实验目的 了解生物化学中典型的血红蛋白的性质和结构以及结合在蛋白上的辅基的作用。 学习一种生物无机生化科研中常用的为金属酶和蛋白质代换金属离子的方法。 学习快速扫描分光光度计的使用及紫外可见吸收光谱的应用。 学习柱层析和透析袋脱盐的方法。 二、实验原理 血红蛋白 (Hemoglobin) 是由二价铁 Fe(Ⅱ )血红素作为辅基与多肽链结合组成的一种 结合蛋白，它是由四个亚基组成的四聚体，分子量大约为 65000。四个亚基中，两个亚 基具有相同的氨基酸序列，称为 α —亚基，每条链含 141 个氨基酸，另外两个氨基酸序 列相同的亚基，称为 β —亚基，各含 146 个氨基酸。两种亚基有其各自的二级、三级空 间结构，亚基之间以非共价键结合在一起。每个亚基中均含有一个血红素辅基，血红素 是一个铁原卟啉Ⅳ，它处于一个疏水环境，此疏水环境对血红蛋白的可逆载氧功能起着 非常重要的作用。  Fe(Ⅱ )在血红蛋白中始终是以  +2  价还原态存在的，若被氧化成  Fe(Ⅲ )， 则称为高铁血红蛋白，它就失去了可逆载氧功能。 血红素辅基与血红蛋白均以非共价键相连，其中包括  Fe(Ⅱ )与近端组氨酸  (F8His) 上 的 N ε上的配位键；卟啉环侧链丙酸阴离子与蛋白氨基酸侧链之间的盐桥；以及卟啉环 中乙烯基与蛋白的疏水相互作用。在酸性条件