第二节-蛋白质的共价结构.pptVIP

2021/2/11 * （六）多肽链的部分裂解 酶裂解法:胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）、嗜热菌蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶等,它们各自有自己的水解专一性。蛋白酶分为内肽酶和外肽酶（羧肽酶、氨肽酶）。 化学裂解法:溴化氰（只裂解由Met的羧基形成的肽键,选择性）、羟胺（裂解Asn-Gly之间的肽键，也能部分裂解Asn-Leu及Asn-Ala之间的肽键，专一性）。 2021/2/11 * 蛋白酶的专一性 2021/2/11 * 溴化氰裂解法 溴化氰只裂解由Met的羧基形成的肽键 2021/2/11 * ★肽段的分离纯化 A.电泳法 : ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 根据分子量大小分离 B.离子交换层析法:根据肽段的电 荷特性分离。 C.液相HPLC法:根据肽段的极性 分离。 D.凝胶过滤:分子筛。 2021/2/11 * （七）氨基酸序列测定 1、质谱法:两台质谱仪联用,第一台质谱仪通过电喷射电离使肽段带上电荷,将不同大小的肽段分离。第二台质谱仪分析肽段的序列。在第二台质谱仪上，小肽段在碰撞池中与氮气分子或氩气分子碰撞，碎裂成依次少一个氨基酸残基的碎片，分析这些碎片的质量差，可得出序列。 特点:灵敏度高、所需样品少、测定速度快。 2021/2/11 * 串联质谱仪 2021/2/11 * 串联质谱测序工作原理 分离肽段 测序 2021/2/11 * 2、Edman降解法:由N端向C端逐步降解。先将被测肽段的羧基端固定到不溶性的树脂上,便于分离切下的氨基酸和剩余的肽段。 3、酶降解法:用外肽酶逐个切下氨基酸分析。只能分析很少的几个氨基酸。 4、根据核苷酸序列的推定法：找到该蛋白质的基因,从基因的编码序列按三联密码推出氨基酸序列。 2021/2/11 *  同源蛋白质:来自不同生物体、 执行同一 /相似功能的蛋白质 同种蛋白质:来自相同生物体、 执行同一功能的蛋白质 1、同源蛋白质 三、蛋白质的AA序列与生物功能 （一）同源蛋白质的物种差异与生物进化 2021/2/11 * 一百多个AA残基 MW约12.5×103 2 8个不变残基  2、细胞色素C与系统树 2021/2/11 * invariant residues (yellow) conservative substitutions (blue) nonconservative or variable residues (unshaded) Conservation and variation of cytochrome c sequences 2021/2/11 * 对不同种属的细胞色素c的研究同样指出具有同种功能的蛋白质在结构上的相似性。 对100个种属的细胞色素c的一级结构进行了分析,发现亲缘关系越近,其结构越相似。 细胞色素c的氨基酸顺序分析资料已经用来核对各个物种之间的分类学关系，以及绘制进化树。 根据进化树不仅可以研究从单细胞到多细胞的生物进化过程，还可以粗略估计各种生物的分化时间。 2021/2/11 * 2021/2/11 * 1、氧合血红蛋白 （二）同源蛋白质具有共同的进化起源 2021/2/11 * 该酶类活性中心的Ser残基起关键作用 胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、 凝血酶和纤溶酶 有序列同源性 对底物偏爱不同 2、丝氨酸蛋白酶类 2021/2/11 * （三）血液凝固与AA序列的局部断裂 凝血酶原 血液凝固:在凝血因子的作用下,可溶性的血纤蛋白原转变为不溶性的血纤蛋白网。 可溶性的 血纤蛋白原 酶 有活性的凝血酶 不溶性的 血纤蛋白网 2021/2/11 * （一）肽的人工合成 保护（氨基、羧基、侧链活性基团） 活化（氨基、羧基） 缩合剂 （二）胰岛素的人工合成 1965年中国完成了牛胰岛素的全合成。（三）固相肽合成 四、肽与蛋白质的人工合成 2021/2/11 * （一）肽的人工合成 最广泛应用的氨基保护基是苄氧甲酰基,它可以用催化加氢或用金属钠在液氨中处理去除。其它可以用作氨基保护基的还有三苯甲基、叔丁氧甲酰基、对甲苯磺酰基等,这些基团可以用HBr/CH3COOH在室温下除去。 氨基的保护 2021/2/11 * 羧基的保护 羧基一般用盐或酯的形式保护。盐是对羧基临时性的保护。酯有甲酯、乙酯、苄酯和叔丁酯等。甲酯