细胞破碎蛋白质复性和固液分离.pptVIP

2021/2/6 * 1）细胞收集或去除 用鼓泡法从发酵液或细胞悬浮液分离细菌和酵母的细胞有较多的研究,还有一些从培养液中收集孢子、藻类细胞或从废水中除去微生物细胞的报道。 2）蛋白质和多肽、酶的提取分离 处于研究阶段,未见应用报道 3）中药有效成分的分离提取 中药含有多种表面活性物质,如蛋白质高分子物质和皂苷类小分子物质。研究表明甘草中的甘草酸可用泡沫分离法加以浓缩。植物细胞培养液中的次生代谢产物可用泡沫分离法进行分离浓缩。 应用:在生物技术领域主要用于细胞收集或去除、蛋白质和酶的提取及天然产物的浓缩和分离。 2021/2/6 * 避开固液分离的探索---扩张床吸附 流化床? 2021/2/6 * 问题 举例说明机械法和非机械法破碎细胞的分类,基本原理及优缺点。 试述包含体复性的主要方法及优缺点。 写出斯托克斯公式,分析其基本意义.从该公式分析离心的主要条件. 从达西公式分析利用膜进行固液分离要注意的问题。 试述双水相萃取的原理及需要考虑的问题。 * ?#? 3 ?#? 4 * 特性应该指：性质（温度，pH，电荷，稳定性等），包括来源，各种杂质的不同所采用的去除方法也不相同。 * 纯化精制将在后面各章作为重点学习，前面主要讲述初级过程； 包含体的溶解和蛋白质的复性是基因工程产品成功提纯的关键。 * DTT 二硫苏糖醇，GSH 谷胱甘肽，β－ME： β－巯基乙醇 * * 该膜具有挡住90%或95%的该分子量标准试验物的能力—MWCO，超滤膜常用规格：1万MWCO、10万MWCO、30万MWCO；微孔膜常用规格：0.2μm、0.45μm、0.6μm。 * 缺点： 造价高； 过滤面积小； 表现对蛋白质一定的吸附； * 2021/2/6 * 斯托克斯公式(Stokes): Uc=d2(ρs-ρL)rω2/18μ Uc——颗粒沉降速度; d——颗粒直径(假定为球形) Ρs——固体密度 ρL——液体密度 r——离心半径; ω角速度; (rω2:离心力) μ——液体粘度 2021/2/6 * 分离因数: a= (rω2:离心力)/g a——衡量离心力的大小主要指标,应该主要是增大角速度而不是直径。 提高离心效果可通过增加转速和延长时间来取得。 (rω2:离心力):固液分离最重要的影响因素 2021/2/6 * 转筒常规工业用离心机（--张家港华大离心机公司） SSC型离心机为三足式上部人工卸料沉降离心机,该系列离心机装鼓壁上无孔,属沉降型转鼓,操作维修方便。主要适用于固相颗粒细小,悬浮液粘性较大,过滤介质再生困难,且含量较少的悬浮液的固液分离。  2021/2/6 * 管式工业用离心机（--张家港华大离心机公司） 悬浮液从进料管进入转鼓,固相颗粒在离心力场作用下受到离心力的加速沉降至转鼓内壁,沉降的颗粒在螺旋输送器叶片的推动下,从（直筒段）沉降区通过（锥段）干燥区至固相出口排出;经澄清的液相从溢流孔溢出。从而实现固、液相自动、连续的分离。 可应用于脱水、浓缩、分级澄清等不同场合。 2021/2/6 * 2021/2/6 * 刮刀卸料工业用离心机（--张家港华大离心机公司） 主电机带动套装的内外转鼓全速旋转,物料由进料管引入转鼓,在离心力作用下,液相物穿过滤布和内转鼓壁滤孔排出内转鼓,汇集到内外转鼓间的间隙内,穿过到虹吸室的通孔进入虹吸室,再由虹吸装置抽走排出机外。固相物截留在内转鼓形成环形滤饼层。进料达到预定容积后停止进料,进一步分离,此时可进行洗涤。洗涤、分离结束,刮刀自动旋转,将固相物刮下经输料螺旋排出机外,然后自动洗网,开始下一个循环。 2021/2/6 * 二、微孔膜过滤 根据流体各组分尺寸大小的不同,利用高分子聚合膜,过滤分离微米级的细胞、细胞碎片和生物大分子的过程。 何谓微孔膜过滤? 2021/2/6 * 切割分子量? MWCO 微滤（0.1~10μm):分离固体颗粒 超滤（0.001~0.1μm):浓缩大分子物质 反渗透（0.001μm):从小分子中脱除水分 微孔膜过滤的3种方式: 2021/2/6 * 缺点: 技术难以掌握,影响因素多; 稳定性和重复性不好; 膜堵塞问题难以解决! 微孔膜过滤特点 优点: 容易做到封闭式操作,不受环境污染 设备投资少,操作安全; 加工量可大可小,十分方便; 有利于分离密度差小而难以离心的固体,可直接用于下游的层析过程。 2021/2/6 * 微滤技术要点: 选择合适的膜: ①不与蛋白质、脂类等发生吸附; ②孔径合适。 不锈钢板式过滤器 不锈钢杯式过滤器 正压过滤器 机电一体式微滤过滤系统 2021/2/6 * 微滤技术要点: 2.选择合适的操作条件: 过滤方程（达西公式）: V=ΔP/[μ(Rc+Rm)] V:过滤速度,ΔP:压力差,μ: