分解纤维素的微生物.pptVIP

1、斜面保藏 （临时保存） 2、甘油保藏 （长期保存） * 森林生态系统 1、生态系统的成分？ 2、分解者的作用？ 3、土壤中分解尿素的细菌的如何分离？ 4、枯枝落叶的成分？ 回顾： 土壤中能水解纤维素的微生物 1、纤维素在生物圈的分布状况？ 2、纤维素酶的组成及作用？ 一种复合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶 回顾：纤维素和纤维素酶 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 C1酶、CX酶 葡萄糖苷酶 能够溶解纤维素的粘细菌1 能够溶解纤维素的粘细菌2 选择培养 1、配方是液体培养基还是固体 培养基？为什么？ 2、此培养基对微生物是否有选择作用？如果有，是如何选择的？ 3、你能否设计一个对照实验，说明 选择培养基的作用？ 用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照 选择培养基配方： 纤维素粉 5g NaNO3 1g Na2HPO4﹒7H2O 1.2g KH2PO4 0.9g MgSO4﹒7H2O 0.5g KCl 0.5g 酵母膏 0.5g 水解酪素 0.5g 将上述物质水解后，用蒸馏水定容到1000ml 有。碳源是纤维素，所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。 以纤维素作为唯一碳源 利用纤维素刚果红培养基筛选菌种的原理是： 1、刚果红可以跟大分子多糖牢固结合。 2、纤维素是大分子多糖，跟刚果红牢固结合。 3、纤维素酶降解平板中的纤维素成小分子糖，刚果红无法 与小分子糖结合，就被洗脱下来，呈现透明圈。 刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红 思考：这两种方法各有哪些优点与不足 方法一 缺点是操作烦琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发 生混杂；优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 方法二 优点是操作简便，不存在菌落混杂问题 缺点一是由于培养基中还含有淀粉类物质，可以使能产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应；缺点二有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红，形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分 土壤中纤维素分解菌的分离 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 ①分布环境 （1）土壤取样： 富含纤维素的环境中 操作步骤 由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 ②原因 ③实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。 ④讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？ 答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。 （2）选择培养 ①目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物 ②操作：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30 mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30 ℃下振荡培养1～2 d，至培养基变混浊。吸取一定的培养液（约5 mL），转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊。 （3）梯度稀释： （4）涂布培养 1、刚果红染色法: （5）筛选菌株： 常用的刚果红染色法有两种， 一种是先培养微生物，再加入刚果红进行染色反应， 另一种是在倒平板时就加入刚果红 试验结果 实验组： 对照组： 经刚果红染色法，菌落周围将会出现明显的透明圈 不含纤维素的培养基经刚果红染色法，菌落周围不出现明显透明圈 讨论：这两种方法各有哪些优点与不足？ 方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。 方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂的问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应，但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。 方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间的培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。 在产生明显的透明圈的菌落，挑取并接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，可获得纯培养。 2、挑菌 加入青霉素的培养基： 加入高浓度食盐的培养基： 不含有机碳源的培养基： 自养型（硝化细菌） 酵母菌、霉菌 金黄色葡萄球菌 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，