人源性生物制品.ppt

2021/3/13 * 低温乙醇法优点 相对简单的操作,产量高,适宜工业化规模生产。 保持蛋白质的天然特性。 抑菌作用。 同时分离多种血浆成分,适于血浆综合利用。 乙醇作为主要原材料,价格低廉,易于获得。 2021/3/13 * 血浆 EOH：8%，PH：7.2，T：-3℃，PC：5.1% 上清Ⅰ 沉淀Ⅰ EOH：25%，PH：6.9，T：-5℃，PC：3.0% 上清Ⅱ+Ⅲ 沉淀Ⅱ+Ⅲ（供分离Ig用） EOH：18%，PH：5.2，T：-5℃，PC：1.6% 上清Ⅳ-1 沉淀Ⅳ-1 Cohn6法工艺流程 2021/3/13 * 上清Ⅳ-4 沉淀Ⅳ-4 EOH：40%，PH：4.8，T：-5℃，PC：0.8% 上清液Ⅴ 沉淀Ⅴ EOH：40%，PH：4.5，T：-3℃，PC：3% 上清液 不纯物质 EOH：40%，PH：5.0，T：-5℃，PC：10% Cohn6法工艺流程 2021/3/13 * EOH：40%，PH：5.2，T：-5℃，PC：2.5% 上清液 白蛋白 Cohn6法工艺流程 2021/3/13 * （1）离子交换层析 （2）凝胶过滤层析 （3）亲和层析法 层析法 2021/3/13 * 常用层析载体 纤维素（cellulose） 葡聚糖凝胶（Sephadex） 琼脂糖凝胶（Sepharose） 聚丙烯酰胺凝胶（Bio-gel） 多孔玻璃珠（Bio-Glass） 2021/3/13 * 重组人血白蛋白（补） 人血清白蛋白(human serum albumin,HSA）是迄今为止产量最大、用量最多的血浆蛋白药物,在临床和生物产品中的广泛应用使其在国内外均具有很大市场。 由于rHSA批次之间的产品均一度好、纯度高、生产规模不受限制、无病毒传播风险,从而赋予其巨大的市场前景。 2021/3/13 * 重组人血白蛋白的种类 输注用rHSA 辅料级rHSA 重组白蛋白融合蛋白药物 2021/3/13 * 天然尿激酶（UK）是由两条肽链通过二硫键连接而成。是丝氨酸蛋白酶,丝氨酸、组氨酸是活性中心必需的氨基酸。血纤维蛋白溶酶原是唯一的天然蛋白质底物,使纤溶酶原转为纤溶酶。 尿激酶用于治疗各种新血栓形成或血栓梗塞疾病。 二、尿激酶（urokinase）的制备 2021/3/13 * （3）工艺流程（图3-2） 男性尿 沉淀 10℃下，pH8.5 上清尿液 酸 化 pH5.0-5.5 酸化尿 吸 附 硅藻土，5℃ 硅藻土吸附物 洗涤 5℃，水 硅藻土柱 洗脱 0.02%氨水，0.1mol/L NaCl 洗脱液 去热源、色素 DEAE-SephadexA50柱，pH8.0, （二乙氨乙基葡聚糖） 流出液 （活性部分） 浓 缩 羧甲基纤维素（CMC柱，pH4.2) CMC柱 洗脱（HAC-NaAC) NH3+NaCl,pH11.5-11.8 洗脱液 透 析 H2O,4℃ 透析液 冻 干 成品 图 3-2 尿激酶生产工艺路线 2021/3/13 * （4）工艺要点 ①收尿:男性尿,8h内处理。调尿液pH6.5以下。 ②硅藻土吸附:加入1%的硅藻土,5℃下搅拌吸附1h ③洗脱:硅藻土吸附物用5℃冷水洗涤后装柱,当洗脱液由清变浑时开始收集。 ④除热原、色素:收集液用饱和NaH2PO4,调pH8.0,加NaCl调电导至22ms,过DEAE-Sephadex A50层析柱,收集流出活性部分。 2021/3/13 * ⑤CMC浓缩:流出液用1mol/L HAc调至pH4.2,用蒸馏水调电导至16-17M/Ω,通过CM-C层析柱。用10倍体积的pH4.2的HAC-NaAc缓冲液洗涤柱床。洗后用0.1%氨水0.1mol/L NaCl溶液洗脱尿激酶。收集活性组分,杂质被吸附。 ⑥产品质量:无色澄清液或白色冻干粉末。酶活力15000 IU/mg蛋白质。 2021/3/13 * （1）HCG的性质 HCG是一种糖蛋白,由α、β两亚基组成,易溶于水,pI为3.2-3.3。HCG由胎盘滋养层合体细胞所分泌。妇女妊娠45-70天,尿中HCG含量可达30.000-50.000IU/24h。 治疗女性不育症,神经性皮炎。男性性功能过低症和隐睾症,子宫出血和习惯性流产。 三、人绒毛膜促性腺激素（HCG）的制备 2021/3/13 * 图3-3 HCG生产工艺路线 孕妇尿 [粗制]尿：苯甲酸：乙醇/1：0.075：5） 用HCl调pH 4-5 HCG(粗品） 提取 NaAC pH4.8 提取液 透析 水，5℃以下 透析内液 吸附（CM SepharoseCI-6B） 羧甲基琼脂糖凝胶 吸附后交换剂 洗涤Ⅰ，Ⅱ峰 NaAC,pH4.8,pH5.9 洗涤后交换剂 洗脱 NaAC,pH8.5 洗脱液 冷冻干燥 —3