拟南芥phot2基因超表达载体的构建及转化.docx

拟南芥PHOT基因超表达载体的构建及转化 收稿日期： 2013-06-08 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 植物材料拟南芥野生型 gl1 （ Col-0 生态型）、 phot1 突变体。 1.1.2试剂、菌株、载体大肠杆菌菌株 DH5况、农杆菌菌株 GV3101超表达载体PSUPER130O TaqDNA聚合酶为笔者所在实 验室保存；克隆载体 pMD18-T、限制性内切酶、Oligo （ dT）引 物、核酸分子量标准（marker）、DNA凝胶纯化回收试剂盒及质 粒提取试剂盒均购自 TaKaRa公司；Trizol试剂购自Invitrogen 公司；高效连接试剂盒 Soultion I 、M-MLV反转录酶、潮霉素 B （hygromycin B ）购自 Promega公司；KOD-plus DNA 聚合酶购 自ToYoBo公司；各类抗生素购自 Solarbio 公司；dNTP普通 PCR buffer购自天根生化科技 XX公司。引物由上海生工生物工 程技术服务XX公司（以下简称上海生工）合成（表 1）。 1.2 方法 1.2.1总RNA提取及cDNA合成将野生型gl1种子点播于0.6% MS固体培养基上，取生长 2周左右的无菌苗0.1 g，液氮研磨， 按照Trizol试剂说明书提取总 RNA。将提取的总RNA在 1%琼脂 糖凝胶上电泳检测。以合格的总 RNA为模板，参照M-M