免疫学概论-抗原和抗体的制备与应用.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * 2021/3/14 * 步骤 9单克隆抗体的大量制取 腹腔接种 2021/3/14 * 1.辛酸硫酸铵沉淀法 原理:先加正辛酸沉淀杂蛋白,后加硫酸铵 沉淀抗体。 特点: 成本较低,操作简单; 抗体活性损失小； 抗体纯度高； 抗体回收率低； 需要高速冷冻离心机。 步骤 10单克隆抗体的纯化 2021/3/14 * 2 亲和层析法: 原理:利用蛋白A或蛋白G通过共价键联接到活化的固相载体上,吸附抗体,然后采用改变pH值的方法将抗体洗脱分离。 特点: 抗体纯度高; 纯化速度快； 抗体回收率低； 抗体活性有损失； 成本高，费用大。 2021/3/14 * 单克隆抗体的优缺点 优点 : 在体外“永久”地存活并传代 用相对不纯的抗原,获得大量高度特异的、均一的抗体。适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法 可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗 局限性 : 固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围 反应强度不如多克隆抗体 制备技术复杂、费时费工、价格较高 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 在撞击下爆炸性分解：理论上每克叠氮化钠分解可以产生517毫升的氮气 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 2021/3/14 * 2021/3/14 * 二 、多克隆抗体的特点 特点: 不均一性 (抗体的异质性), 由外源性和内源 性因素引起的 1) 外源性: 抗原分子结构复杂, 具有多种抗原 决 定簇, 每种决定簇引起一种相应抗体的 产生. 反映了机体对抗原物质的精细结 构的识别能力. 2) 内源性: 免疫球蛋白的血清型(回顾) 2021/3/14 * 　　　 免疫蛋白为大分子蛋白质,具备抗原的各种性质,对异种、同种异体，甚至宿主自身都是良好的抗原，且是一个抗原复合体，带有多种抗原决定簇。Ig分子的这种异质性反映了抗体形成细胞的遗传性差异，代表抗体分子在不同水平上的遗传变异性;通常可用血清学方法检测出来，并据此将Ig及其肽链（H和L链）分成不同的血清学类型。 同种型 同种异型 独特型 免疫球蛋白的血清型: 2021/3/14 * 三、多克隆抗体的制备流程 1.免疫动物的选择 2.免疫的方法 3.动物采血法 4.免疫血清的分离与保存 2021/3/14 * 一、免疫动物选择 能作免疫接种用的动物主要是哺乳类和禽类。 兔、绵羊、豚鼠、鸡、山羊和马。 1.抗原与免疫动物种属差异越远越好; 2.动物必须适龄、健壮、无感染的正常动物、 体重合乎要求; 3.不同动物种类对同一免疫原有不同的免疫 应答; 4.按需要量选择大小不同的动物。 2021/3/14 * 二、免疫方法 4.免疫方案 ①全量免疫法:弗氏佐剂抗原多次注射 ②微量免疫法:卡介苗7天弗氏佐剂1月 抗原 ③混合免疫法:综合皮下、淋巴结和静脉 1.免疫原的注射剂量 2.免疫途径:免疫反应产生速度依次为静脉＞ 腹腔＞肌肉＞皮下＞皮内＞淋巴结＞足掌 3. 免疫时间间隔:首次和第二次之间10-20天为宜,第二次以后 7-10天。免疫次数3-5次。 2021/3/14 * 三、动物采血法 1.颈动脉放血法:最常用的方法---常用于家兔的全采血 2.心脏采血法:要求操作熟练--常用于家兔和豚鼠的采血。 3.静脉采血法:颈静脉采血常用于绵羊;耳静脉采血常用于 家兔；尾静脉采血常用于小白鼠和大白鼠。 1.4℃保存:可保存3～6个月 2.低温保存:-20～-40℃,可保存2～3年 3.冰冻干燥保存:可保存3～5年 2021/3/14 * 第四节 抗体的纯化和鉴定 1.抗体特异性的纯化 2.特异性IgG类抗体的纯化 3.