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2020/11/24 PCR反应原理及其操作 1.PCR的基本原理 2.PCR反应体系 3.PCR的基本步骤 精品资料 你怎么称呼老师？ 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？ 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ 教师的教鞭 “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……” PCR的基本原理 试管中进行的DNA复制反应，依据 DNA半保留复制的机理； 体外DNA分子于不同温度下可变性和复性的性质； 通过人为控制体外合成系统的温度，使 双链DNA变成单链， 单链DNA与人工合成的引物退火， DNA聚合酶使引物沿着单链模板延伸为双链DNA。 PCR反应体系 4种dNTP混合物 各200umol/L （dATP,dGTP,dCTP,dTTP） 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L PCR的基本步骤 ?1. ?DNA变性 （90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA。 2. ?退火（复性） （25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。 3. ?延伸 （70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。 高温变性 低温退火 中温延伸 *
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