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第7节电泳分离 * * * * * * * * * * * * * 第7节电泳分离 2. 操作：（SDS及PAGE，即变性及非变性） 1）制胶: （变性：buffer 中加0.4%SDS） a. 分离胶：根据待分离样品的分子大小选择一定浓度的分离胶（查表），配制分离胶溶液： Acr:Bis=29:1，分离胶buffer, TEMED, AP, 水 迅速倒胶，加水使液面平坦，室温0.5h聚合完全。 b. 浓缩胶：用浓缩胶buffer。插上梳子。 第7节电泳分离 2）样品制备： a. PAGE: 样品＋样品缓冲液（蔗糖或甘油＋指示剂溴酚蓝） b. SDS: 样品＋样品缓冲液（SDS，甘油，巯基乙醇，溴酚蓝），煮沸2~5min， 以除去亚稳态聚合。 3）加样及电泳： SDS: 电极buffer中加0.1%SDS，溴酚蓝距下端1cm时停止电泳。 第7节电泳分离 4）固定及染色 a.固定：将凝胶浸于7％乙酸或12.5％三氯乙 酸（TCA）中固定蛋白质组分。 b.染色： 考马斯亮蓝染色法 银染法（灵敏度比前者高100倍） 其它的染色方法：氨基黑、阿尔辛蓝，过碘酸－Schiff试剂（糖蛋白）。 第7节电泳分离 第7节电泳分离 四、等电聚焦 ( isoelectric focusing，IEF ) 利用蛋白质具有不同