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LightCycler? 480 中文操作说明 罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门 February 2008 LightCycler 480 中文操作說明 目录 一 . 启动机器与软件 3 二 . 软件设定 --- 开启新实验 5 三 . 样品编辑 9 四 . 结果分析 12 五 . 报告 18 六 . 数据转移至其它计算机 (数据输出与输 19 入 ) 七 . 使用者管理 19 2 LightCycler 480 中文操作說明 一． 启动机器与软件 启动机器 机器主开关位于机器右后方。 机器正面两个警示灯代表机器状态。待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转变成稳定橘色灯，警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约三分半钟 )，表示机器已经启动完成。 左警示灯 右警示灯 机器状态 橘 * 闪烁 * 橘 *闪烁 * 正在初始化 绿 橘 机器启动完成 96/384孔盘还未放入 绿 橘 *闪烁 * 96/384 孔盘正在放入中 绿 绿 机器启动完成 96/384 孔盘已经放入 绿 * 闪烁 * 绿 *闪烁 * 实验进行中 3 LightCycler 480 中文操作說明 3. 按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之 96 或 384 孔 盘。放置完成后，左右两警示灯都呈现绿色。 启动软件 开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入Windows。 User name: OPERATOR Password: LC480 2. 开启 LightCycler 480 软件，并输入正确的使用者与密码。 4 LightCycler 480 中文操作說明 二．软件设定 -- 开启新实验 设定新实验 软件开启后，会进入主画面。点选 “New Experiment”。 出现实验设定窗口。任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的按钮。 5 LightCycler 480 中文操作說明 设定实验 若要套用设定好的实验步骤 (Template)，请跳至 6.。 1. 在实验设定画面上方，先选择适当的 Detection Format。选项包含 : 另外可再点选 “Customize勾”选所需的滤片组合。 输入反应体积 : 96 well plate 范围为 10-100 ul，而 384 well plate 范围为 5-20 ul。 6 LightCycler 480 中文操作說明 3. 设定实验步骤 (Program) 设定 program，包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。利用 『+』与 『－』增加或 删除步骤。 设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。通常 Amplification (PCR) program 设定成 『Quantification』，而 Melting Curve program 设定成『 Melting Curve 』。 设定详细温度变化 (依照不同实验方法与设计而有所不同 ) 点选各个 program 即可设定详细温度变化步骤，请根据产品说明书来设定，利用 『+』与 『－』增加或删除步骤。需要设定的参数包含 Target (℃ ) 目标温度， Acquisition Mode (荧光侦测模 )， Hold (hh:mm:ss) 停留时间。 Ramp Rate (℃/s) 为升降温速度，范围如下： Ramp Rate (℃/s) Heating up Cooling down 96-well Block 1.0 –4.4 ℃/s 1.0 –2.2 ℃/s 384-well Block 1.0 –4.8 ℃/s 1.0 –2.5 ℃/s 若设定温度低于 50℃，请把 Ramp Rate 调整成 1.5℃/s (96 well) 或 2.0℃/s (384 well)。 7 LightCycler 480 中文操作說明 将实验步骤储存成 『Template』以便下次进行套用。点选左下角 “Save As Template”即可把此步骤储存起来。 若要进行套用时，请直接点选窗口左下角 “Apply Template”，选择欲套用之实验步骤即可。 设定完成后点选 “Start Run ”开始进行实验。 跳出档案储存窗口，请输入欲储存之文件名称。 实验进行中会进入另一个 Data 窗口，窗口下方按键功能如下： End Program : 结束此 Program, 进入下一个 Program。 10 Cycles : 实时增加循环数目。 Abort Run: 马上结束此实验，请注意，若按此键，则此次实验的结果将不储存。 8 LightCycler 480 中文操作說明 三．样品编辑 将样品分群