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荧光分光光度法测定维生素 B6 的含量 荧光分光光度法测定维生素 B 的含量 6 荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种 仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光 寿命、荧光偏振等许多物理参数 , 从各个角度反映了分子的成键和结构情 况。通过对这些参数的测定 , 不但可以做一般的定量分析 , 而且还可以推 断分子在各种环境下的构象变化 , 从而阐明分子结构与功能之间的关系。 荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是 190-650nm ，发射波长扫描范围 是 200-800nm 。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。 荧光分光光度计的工作原理：物质荧光的产生是由在通常状况下处于 基态的物质分子吸收激发光后变为激发态 , 这些处于激发态的分子是不稳 定的 , 在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧 光． 不同物质由于分子结构的不同 , 其激发态能级的分布具有各自不同的 特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射 光谱；，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。 在溶液中，当荧光物质的浓度较低时 , 其荧光强度与该物质的浓度通常 有良好的正比关系 , 即 IF=KC, 利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析 , 与紫外 - 可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。 荧光分光光度计基本结构： ①光源： 为高压汞蒸气灯或氙弧灯， 后者能发射 出强度较大的连续光谱，且在 300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。 ②激发单色器： 置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器， 筛选出特 定的激发光谱。 ③发射单色器：置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第 二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。④样品室：通常由石 英池 ( 液体样品用 ) 或固体样品架 ( 粉末或片状样品 ) 组成。测量液体时， 光源与检 测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。⑤检测器：一般用光 电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。 荧光分光光度计是用于电子扫描液相荧光标志物所拍发的荧光光谱的一种 摄谱仪。应用于科学研究、 化工、医疗药品、 生化、环保和临床检验、 食物检验、 讲授实验等领域。 本次实验所用样品维生素 B6 （vitamin B 6 ），又称吡哆素。是一种水溶性维 生素，遇光或碱易破坏， 不耐高温。 一种含吡哆醇或吡哆醛或吡哆胺的 B 族维生 素。 1936 年定名为维生素 B 。维生素 B 为无色晶体，易溶于水及乙醇，在酸液 6 6 中稳定，在碱液中易破坏，吡哆醇耐热，吡哆醛和吡哆胺不耐高温。维生素 B6 在酵母菌、肝脏、谷粒、肉、鱼、蛋、豆类及花生中含量较多。维生素 B6 为人 体内某些辅酶的组成成分， 参与多种代谢反应， 尤其是和氨基酸代谢有密切关系。 临床上应用维生素 B6 制剂防治妊娠呕吐和放射病呕吐。 维生素 B6 及其辅酶的结构式 1