菘蓝叶片离体培养及植株再生.docVIP

耘蓝叶片的离体培养及植株再生 姓名： 学号： 指导老师：倪苏刘帆 专业： 学院：农学院 2013 年 7 月 茯蓝叶片的离体培养及植株再生 摘要：以惡蓝幼嫩叶片为外植体，探讨了不同外源激素种类、组合及其不同浓 度对惡蓝叶片丛生芽诱导的影响，并完成了植株再生。结果表明，在MS培养基 的基础上添加6-BA+NAA都能成功诱导出丛生芽；但当添加激素为2,4—D+KT 时则不能诱导丛生芽，且在加入6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L时长势最好，为最 佳诱导出芽培养基，并在添加MS+NAA1.0mg/L的生根培养基中长出不定根。 关键词：蘇蓝；叶片离体培养；植株再生 茯蓝（皿心indigotica Fort.）是十字花科茯蓝属二年生草本植物⑴，具干燥的根 入药称作板蓝根，具有清热解毒、凉血利咽Z功效，用丁治疗盛丰感冒、发热、 头痛、咽喉肿痛、扁桃体炎、急性腮腺炎、咳嗽痰多等多种生呼吸道感染疾病⑵, 其叶片（大青叶）具有抗菌和清热解毒的功效⑶，是常见的大宗药材，具有重耍的 经济价值。为满足药材市场对大量和优质的茯蓝需求以及育种工作需求，茯蓝的 组培快繁技术体系显得尤为重耍，关于其组培快繁已有不少报道⑷叫木试验的 研究在前人的基础上优选了松蓝叶片离体培养基，旨在为低成本、快速高效的植 株种苗生产提供技术前提，同时也为松蓝的优质育种、转基因及遗传研究等研究 T作奠定基础。 1材料与方法 1.1供试材料 耘蓝幼叶（由四川农业大学农学院植物生理学系提供） 1.2试验方法 1.2.1培养基设计 培养基设计如下： 所有培养基均附加琼脂5g/L、蔗糖30g/L,并调整PH至5.8,其中生根培养 基另外加入0.2%的活性炭，每500mL培养基分装于42支试管或10个玻璃瓶中， 试管分成7支/包棉塞封口，捆扎，玻璃瓶用封口膜封口，培养基需耍在高压蒸 汽灭菌锅中121 °C高温湿热灭菌20分钟后放至常温下备用。 诱导培养基见表1,继代培养基选择诱导培养中长势最好的一组；生根培养 基设计见表2. 表1不同激索组合诱导培养基 序号 不同激素组合诱导培养基 1 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1 mg/L 2 MS+6?BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L 3 MS+6-BA2.0mg/L+NAAl .Omg/L 4 MS+2,4?D 1.0mg/L+KT0.5mg/L 5 MS+2,4?D2.0mg/L+KT0.5mg/L 6 MS+2,4-D4.0mg/L+KT0.5mg/L 表2不同激素组合生根培养基 序号 不同激素组合生根培养基 1 MS+NAA O」mg/L 2 MS+IBA 0」mg/L 1.2.2材料处理 茯蓝植株提前一天喷施多菌灵800倍液预消莓，试验时剪下健康的先用洗涤 剂漂洗后将叶片置丁纱布中流水冲洗30min,再用75%酒精消毒l()s,无菌水冲 洗2?3次后，用0.1%升汞消壽8min,再用无菌水冲洗5?6次。 1.2.3接种 在超净工作台上讲松蓝叶片切割成约lcn?大小的小片，并用灭菌的滤纸吸 干叶片表而多余的水分，用灭好菌的银子将叶片块正而向下接种到试管中，每管 一小块。 1.2.4诱导培养及数据记录 接种好的叶片暗培养7天，Z后光培养，并每7天记录各指标(见表3), 叶片放在20°C下培养，每天光照12h,强度约1500?20001X。 1.2.5继代 光培养7天后选长势最好的培养基继代培养；从试管中取出从生芽并切分成 小块的单个的芽，接种到玻璃瓶中，每瓶4株，在同条件下继续培养。 1.2.6生根培养及炼苗移栽 继代培养7天后按表2的生根培养基设置接入培养生根，长出完整根系的无 菌苗拿到常温下炼苗3?5天后，揭开封口膜再炼苗3天左右，自来水洗净苗上的 培养基，移栽至土壤中。移栽时苗床应喷施多菌灵80()倍稀释液或稀高镒酸钾溶 液对苗床和幼苗消毒。 2结果与分析 2.1不同激素组合对耘蓝诱导培养的影响 叶片接种后一周观察记录的指标如表3所示，在光培养条件下培养7天后，各组 耘蓝叶片分化效果如图1所示 表3暗培养7天后不同培养基组合启动效果观察统计表 序 号 接种 数/个 污染数/个 真菌/细菌 污竦 真 菌 滓/% 细菌 存活 数/个 存活率 /% 叶片形态变化 个 /个 1 34 0 0 0 0 34 100% 叶卷曲变小，增 厚，有芽点 2 35 0 0 0 0 30 85. 7% 出芽，叶密集，卷 曲，高度2-3cm 3 42 0 0 0 0 41 98% 膨大，卷曲 4 27 0 0 0 0 26 96. 3% 膨大，增厚，卷曲 5 37 0 0 0 0 37 100% 膨大，卷曲 6 27 0 0 0 0 26 96. 3% 膨大，增厚 图1光培养7天后各组培养基中赵蓝叶片情况 图1中从右至左分别是1?