原位杂交技术.pptxVIP

第四章 原位杂交技术;;一、核酸分子原位杂交的基本概念;(二) 基本原理;;定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开 成两条单链的过程。 方法：过量酸、碱、加热、变性试剂如尿素、 甲酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 ;解链曲线; 在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复双螺旋构象，这一现象称为复性。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，又称为退火。;(一)定义：;(二)探针的分类;1. cDNA(complementary DNA);优点： ⑴ 杂交效率比DNA探针高 ⑵ 在检测mRNA时所形成的RNA-mRNA杂交体比DNA-mRNA杂交体稳定 缺点：容易受RNA酶的污染而被降解 ; 根据靶分子而设计序列在DNA合成仪上合成 优点：形成杂交体快速(序列短，杂交时易于穿透) 缺点：特异性较低（短链和简单）;1. 标记物 3H、32P、35S、125I等。 ; (2)非放射性标???物 生物素、荧光素、地高辛素、辣根过氧化酶、碱性磷酸酶等。 ;;;地高辛标记探针的显色检测 ;Diao HL. 2007. Fertil Steril;2. 标记方法;②随机引物法;(2)