第四讲种子制备及发酵控制.pptVIP

pH对同一微生物的不同阶段有不同的影响： 如：青霉素菌体生长最适pH3.5~6.0,产物合成最适pH7.2~7.4。四环素菌体生长最适pH6.0~6.8，产物合成最适pH5.8~6.0 最适PH的选择 初期阶段的PH值要满足微生物有较大比生长速率. 在一定菌体浓度的基础上,PH值应有利于代谢产物的形成. PH的控制 PH值的控制首先考虑基础培养基维持发酵过程中PH的需要(可加磷酸盐缓冲液等),配制培养基时调PH比实际需要高0.4左右。发酵过程需调PH值,可通过补料等手段完成. 补加氨水或尿素,一方面补充氮源,另外又可调PH. PH的控制 流加葡萄糖等碳源也可调PH值. 添加碳酸钙法:当采用生理酸性物质作氮源时,由于NH4+被利用,余下的酸根引起PH下降,在培养基中加入碳酸钙可调节PH. 直接加酸或碱来调节. CO2对发酵的影响 CO2是微生物的代谢产物,大量的CO2积累在发酵液中会给发酵带来一定的影响. 通常CO2对微生物的生长有直接影响,当排气中浓度高于4%时,此时微生物的糖代谢和呼吸作用明显下降. 高浓度CO2的会对某些代谢产物的合成产生影响;如在紫苏霉素生产中,以含的1% CO2空气通入发酵罐,结果发现微生物对基质的代谢极慢,代谢物比正常低33%;而精氨酸生产需要一定浓度CO2的才能得到最大产量. CO2控制 增加搅拌可减低发酵液中的CO2 增加通气量可增加溶氧同时排出发酵液中的 CO2. 溶解氧对发酵的影响 溶解氧的大小是发酵控制的一个重要指标.一般情况下在发酵中要求不断通气和搅拌才能满足要求. 溶解氧在发酵不同阶段表现不同,如图是谷氨酸发酵溶氧变化曲线. 好氧发酵并不是溶氧越大越好,不同的发酵对溶氧有不同的要求 泡沫对发酵的影响及控制 可增加溶氧. 降低装料系数. 增加菌体非均一性. 增加了污染机会. 导致产物损失. 加消泡剂增加成本,给提取带来麻烦. 影响泡沫产生的因素 培养基的成分. 灭菌条件. 发酵时间. 泡沫的控制 机械消泡 消泡剂消泡 机械消泡 原理:利用机械力引起强烈振动或压力变化使泡沫破裂; 优点:不引进外来物质,不易染菌不增加成本. 缺点;不能从根本上消除泡沫. 耙式消泡浆 消泡剂消泡 原理:1)降低泡沫机械强度,使泡沫破裂;2)降低泡沫表面黏度,使液膜上的液体流失,导致泡沫破裂. 常用的消泡剂:天然油脂﹑聚醚类和高级醇等. 溶氧对氨基酸生成的影响（亮氨酸和谷氨酸） * 种子基本要求可简化为:纯﹑壮﹑多. * 杀念株菌素 * 微生物呼吸和发酵过程那种过程产热多? 第五讲种子培养及发酵条件控制 种子扩大培养 种子扩大培养是指将处于休眠状态的保藏菌种接入试管斜面活化后,再经摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种的过程.这些纯种培养物称为种子. 种子基本要求:1)菌种细胞生长活力强,移种至发酵罐后能迅速生长,尽量缩短迟缓期.2)生长性状稳定,保持稳定的生产能力,无杂菌污染.3)菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求. 种子扩大培养流程 压差法接种 种龄:种子罐培养的种子从开始接种到移入下一级种子罐或发酵罐的培养时间. 接种量:接入的种子液体积与接种后培养液体积之比. 发酵过程控制 发酵过程控制是发酵的重要部分 控制难点：过程的不确定性和参数的非线性 同样的菌种，同样的培养基在不同工厂，不同批次会得到不同的结果，发酵过程的影响因素是复杂的，比如设备的差别、水的差别、培养基灭菌的差别，菌种保藏时间的长短，发酵过程的细微差别都会引起微生物代谢的不同。可通过正交实验等手段找出影响发酵的主要因素。 发酵过程的类型 分批培养 补料分批培养 半连续培养 连续培养 分批发酵 分批发酵过程:分批发酵是指在一封闭培养系统内含有初始限制量基质的发酵方式.即培养基中接入菌种以后，没有物料的加入和取出，除了空气的通入和排气。整个过程中菌的浓度、营养成分的浓度和产物浓度等参数都随时间变化。 分批发酵从接种开始算起分三个主要阶段:延滞期,对数期和稳定期. 分批培养中微生物的生长 在迟滞期，菌体没有分裂只有生长，主要是形成生长需要的各种水解酶。因为当菌种接种入一个新的环境，细胞内的核酸、酶等被稀释，这时细胞不能分裂。当细胞内与细胞分裂相关的物质浓度达到一定程度，细胞开始分裂，这时细胞生长很快，比生长速率几近常数。这个时期称为对数生长期。 随着细胞生长，培养液中的营养物减少，废物积累，导致细胞生长速率下降，进入减速期和稳定期。最后当细胞死亡速率大于生长速率，进入死亡期 对于初级代谢产物，在对数生长期初期就开始合成并积累，而次级代谢产物则在对数生长期后期和稳定期大量合成。 分批培养的特点 优点 ： 操作简单，周期短，染菌机会少，生产过程和产品质量容易掌握 缺点 ：生产