pH梯度离子交换色谱高分辨率分离单抗唾液酸化异构体[借鉴].pdfVIP

pH 梯度离子交换色谱高分辨率分离单抗唾液酸化异构体 戴振宇 许群 梁丽娜 赛默飞世尔科技（中国）有限公司 关键词 蛋白异质性；阳离子交换；糖基化； ProPac SCX-10 色谱柱 目标 探索在 Thermo Scientific UltiMate TM 3000 双三元生物兼容高压液相系统 上使用 ProPac ? SCX-10 色谱柱用盐梯度或 pH 梯度离子交换色谱完成单 克隆抗体唾液酸化异构体更高分辨率的分离。 引言 糖基化蛋白 ，包括促红细胞生成素 、单克隆抗体和各种 激素等 ，构成了目前已经得到临床使用的生物药物主要 品种 。通常附着于多糖分子的末端位置的唾液酸 ， 在许 多生物过程如细胞识别和迁移中发挥重要作用 。另外 ， 唾液酸也对蛋白质药物的特性 ，尤其对蛋白质药物的循环 半衰期有显著影响 。 比如 ，唾液酸化的促红细胞生成素的 循环半衰期是 5.6 小时 ，而非唾液酸化的促红细胞生成素 - DGP-3600BM生物兼容双梯度微流泵 1 是 1.4 小时 。因此 ，监测蛋白质的糖基化 ，包括唾液酸化 ， - WPS-3000TBFC恒温生物兼容自动进样器 （集成馏分收集 ） 对于糖蛋白的性质研究和生物药物的生产质量控制有重 - TCC-3000SD柱温箱 要意义 。 μ - DAD-3000二极管阵列检测器与 13 L 检测池体积流通池 TM TM TM 监测糖化蛋白质常用的方法包括完整蛋白质糖型和寡糖 Thermo Scientific Dionex Chromeleon 色谱数据系统软件 ， 谱分析 。常见的寡糖谱分析 （包括荧光标记或未标记两 7.2版本 TM TM 种方法 ）需要酶解释放蛋白质上的寡糖 ，所以比较费时 Thermo Scientific Orion 2-Star台式 pH计 费力 。而完整的蛋白糖基化监测不需要酶解 ，相对方便 耗材 TM TM 简单 ，而且对分离出来的不同糖型的蛋白质可以进行进 Thermo Scientific Target2 尼龙针头过滤器 , 0.45 μm, 一