乌司他丁对控制性降压诱导的缺血缺氧脑损伤Caspase―3表达及凋亡程度.docx

精品文档 精品文档 PAGE PAGE8 精品文档 PAGE 乌司他丁对控制性降压诱导的缺血缺氧脑损伤 Caspase―3 表达及凋亡程度 【摘要】 目的：观察乌司他丁对控制性降压诱导的 缺血缺氧脑损伤 Caspase-3表达及凋亡程度。方法： 60只新 西兰大白兔随机分成 5组，每组12只：正常组（Ⅰ组），控 制性降压组（Ⅱ组，平均动脉压降至基础值的45%组），乌司他丁降压前给药组（Ⅲ组，控制性降压前30min静注乌司他丁10*104IU/kg），乌司他丁降压后给药组（Ⅳ组，控制性 降压开始后30min静注乌司他丁10*104IU/kg），乌司他丁降压前+降压后给药组（Ⅴ组，控制性降压开始前30min和开 始后30min均静注乌司他丁10*104IU/kg）。各组在硝普钠降压一个小时后，停止降压2小时后处死，取出海马组织。TUNEL检测海马凋亡细胞，用Western-blot检测海马组织casspase-3。结果：1、Western-blot检测：与II组比较，三组用药组（III、IV、V组）Caspase-3表达显著减少（P0.01）；与III、IV组比较，V组Caspase-3表达减少（P0.05）。与II组比较，用药三组调亡指数减少（P0.01）。2、TUNEL检测：与II组、III组、IV组、V组比较，显示I组调亡指数最少的（P0.01）。 与III组、V组比较，显示IV组的调亡指数有所增加（P0.05）。结论：1、乌司他丁对控制性降压引起脑缺血缺氧脑损伤是 有保护作用，其可能抑制Caspase-3的表达，减少神经细胞 凋亡有关；2、在三组给药的不同时段比较中，降压前+降压后给药组（V组）Caspase-3的表达最少；由此说明，推荐的给药方法是降压前和降压后同时给药。 【关键词】乌司他丁；控制性降压； 缺血缺氧脑损伤； casspase-3 【中图分类号】 R4【文献标识码】 A【文章编号】 1671-8801（2016）02-0014-02 控制性降压是在手术中常用的技术。同时控制性降压也 会带来风险，有学者报导在控制性降压出现脑损伤等 [1-2]。 关于不同的控制性降压水平对兔海马 CA1神经元影响的研究 结果显示MAP降至基础值的45%，兔海马CA1神经元凋亡程度最严重，因此本研究以MAP降至基础值45%，以观察 乌司他丁对控制性降压诱导的缺血缺氧脑损伤Caspase-3表达及凋亡程度以指导临床应用。 1资料与方法 1.1实验材料 实验动物清洁级新西兰雄性大白兔，体重1.8-2.2kg。实验药物及试剂乌司他丁、TUNEL试剂盒、Caspase-3。1.2实验方法 分组及给药方法健康新西兰白兔60只，雄性，体重 1.8-2.2Kg，由南方医科大学实验动物中心提供。 60只健康新 西兰白兔，随机分成 5组，每组12只：正常组（I组），控 制性降压组（II组，平均动脉压[MAP]降至基础值的 45%组）， 乌司他丁降压前用药组（III组，控制性降压前30min静脉注射乌司他丁10*104U/kg），乌司他丁降压后用药组（IV组，控制性降压开始后30min静脉注射乌司他丁10*104U/kg），乌司他丁降压前+降压后用药组（V组，控制性降压开始前 30min和开始后 30min均给予静脉注射乌司他丁 10*104U/kg）。 动物模型 氯胺酮50mg/kg复合1mg/kg力月西肌注麻 醉（术中肌注氯胺酮 20mg/kg/30min）。沿颈中正切开，分 离气管，插入气管导管，接呼吸机机械通气（潮气量 21ml， 呼吸51bpm，FiO21.0）。分离颈内静脉、穿刺置管，接延长管输液通路并输液（8ml/kg）。在兔腹股沟下缘分离股动脉并 穿刺置管，接测压转换器并开始动脉测压。正常组采用 5% 葡萄糖注射液4ml/（kg*h）连续泵注；降压组及治疗组均采用5%葡萄糖液配制的硝普钠（400ug/ml）开始泵注，10-15分钟内降至目标血压，维持目标血压lh。根据上述分组方案， 给予乌司他丁。降压完毕后，实验动物复压 2h后处死。 1.3标本采集与处理 每组动物中的一半用于灌注固定： 降压停止后2h，打开胸腔暴露心脏，由心尖进针插入升主动脉（同时钳夹腹主动脉，剪开右心耳），快速滴注37℃生理盐水500ml，无血污后改为滴注4%多聚甲醛固定液500mL， 先在5min内灌入约 100ml，余液在 25分钟内灌完。开颅取 出1mm及4mm海马组织，切取右边 1mm3置于4%多聚甲 醛液中后固定，剩余组织放置于中性甲醛溶液中固定、梯度 乙醇脱水、包埋、切片、捞片、烤片。每组中另外一半动物 在复压2h后处死，迅速取出海马组织，在 -80℃冻存，用于 WesternBlot检测。 1.4标本检测方法 1.4.1Western-blot检测