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HPLC法测定盐酸多巴胺注射液的有关物质 【摘要】 目的 筛选合适的高效液相色谱条件，测定盐酸多巴胺注射液的有 关物质。方法 采用不加校正因子的主成分自身对照法，采用 RP HPLC色谱 柱为 Diamonsil C18 (4.6 mmX 150 mm 5 卩 m);流动相为］0.005 mol/mL 十 二烷基硫酸钠 冰醋酸 0.1 mol/mL乙二胺四醋酸二钠(700 : 10 : 2)］ 乙腈 (6 : 4);柱温：40C ；流速：1.20 mL/min ;检测波长280 nm。结果在1?12 卩g/mL范围内线性良好，测定标准曲线为 Y=36493X-629.88 (r=0.9996 , n=11);最低检测限为0.9997 ng。结论该法专属性强，准确，灵敏，可用于 盐酸多巴胺注射液有关物质的检查。 【关键词】 RP HPLC法；盐酸多巴胺注射液；有关物质 盐酸多巴胺(dopamine hydrochloride )注射液的有关物质检查，中国药 典［1］中并没有收载。英国药典中收载的灭菌多巴胺浓溶液和注射用盐酸多巴 胺采用薄层色谱法，需用盐酸甲基多巴胺对照品(4 O methyldopami ne hydrochloride 和 3 O methyldopamine hydrochloride )测定系统适用性 ［2］。本文采用HPLC法进行有关物质检查，方法准确，重现性好，灵敏度 高，可作为本品的有关物质检查方法，更有效的对其进行质量监控。 仪器与试药 TU1901型紫外可见分光光度计，美国 Waters 1525高效液相色谱仪，日本 Shimadzu LC 10Avp高效液相色谱仪。甲醇、冰醋酸、十二烷基硫酸钠和乙 二胺四醋酸二钠均为分析纯试剂。盐酸多巴胺注射液由广州白云山明兴制药有 限公司提供，批号为 050107, 050501，060703。 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：［0.005 mol/mL十二烷基硫 酸钠 冰醋酸 0.1 mol/mL乙二胺四醋酸二钠(700 : 10 : 2)］ 乙腈(6 : 4)； 流速：1.2 mL/min ;检测波长280 nm；理论板数按盐酸多巴胺峰计算为 3 600。在以上色谱条件下，盐酸多巴胺保留时间约为 5 min，见图1。 A.酸性破坏试验 B.碱性破坏试验 C.加热破坏试验 D.氧化破坏试 验 E.光照破坏试验 F.溶解介质氧化破坏试验 G.溶解介质碱性破坏试验 图1 盐酸多巴胺降解产物色谱图(略) Fig.1 HPLC chromatograms of decompositi on products of dopam ine hydrochloride 方法与结果 方法的专属性考察 取盐酸多巴胺对照品适量，用流动相制成每 1 mL中含300卩g的溶液，取 5 mL置试管中，加热30 min进行加热破坏试验；取5 mL置试管中，加质量分 数为10%勺盐酸溶液2滴，加热30 min后用质量分数为10%勺NaOH溶液调为中 性作为酸性破坏试验；取5 mL置试管中，加质量分数为10%勺NaOH溶液2 滴，加热30 min后加质量分数为10%i酸溶液调为中性作为碱性破坏试验；取 5 mL置试管中，加质量分数为30%勺过氧化氢2滴，加热30 min作为氧化破坏 试验；取5 mL置试管中，在紫外灯366 nm下光照1 h作为光照破坏试验；同 时做溶解介质的破坏性试验。各取上述溶液 20卩L注入液相色谱仪，记录色谱 图，结果酸性和碱性对盐酸多巴胺有明显的破坏，溶解介质约在 1.1 min和 1.4 min有杂质峰，拟定的色谱条件对分解产物与主峰有良好的分离，表明方 法的专属性强，见图1。 方法的耐用性考察 选用 Diamonsil C18 (4.6 mmX 150 mm 5 卩 m)、江苏汉邦 C18 (4.6 mm 250 mm 5 卩 m)、Alltech C18 (4.6 mmX 150 mm 5 卩 m)色谱柱等 3 种 不同品牌不同填料的C18色谱柱，取破坏性溶液进样，结果 3种色谱柱对分解 产物与主峰均能达到有效分离。 线性范围 精密称取盐酸多巴胺对照品适量，用流动相溶解并稀释成每 1 mL含1?12 卩g的11个溶液，依法测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲 线图，求得回归方程： Y=36 493X-629.88 (r=0.999 6，n=11)。盐酸盐多巴胺 在1?12卩g/mL范围内呈良好线性关系。 检测限 按上述色谱条件，以信噪比为3：1对检出限进行测定，测得盐酸多巴胺在 此条件下的检出限为0.999 7 ng 。 供试品的测定 精密量取本品适量，加流动相稀释成每 1 mL中含300卩g的溶液作为供试 品溶液；精密量取1 m