双脱氧末端终止测序法原理过程和目标基因cDNA序列拼接 .pptxVIP

双脱氧末端终止法测序的原理、过程和目标基因序列的分析;实 验 目 的; DNA测序技术主要有两种方法，都是在20世纪70年代中期发明的。 A. 双脱氧链终止法（the chain termination method），是通过合成与单链DNA互补的多核苷酸链来读取待测DNA分子的顺序。 B. 化学降解法（chemical degradation method），是将双链DNA分子用化学试剂处理，产生切口，用同位素标记进行测序。;1. Sanger双脱氧链终止法测序原理;基本原理： 聚丙烯酰胺凝胶电泳可以区分长度只差一个核苷酸的DNA分子； 利用DNA聚合酶不能够区分dNTP和ddNTP的特性，使ddNTP参入到寡核苷酸链的3’-末端。因为ddNTP 3’不是-OH，不能与下一个核苷酸聚合延伸，从而终止DNA链的增长。;6;2、具体操作：; 同理第二个反应产生的都是以C结尾的; 第三个反应的都以G结尾, 第四个反应的都以T结尾, 电泳后就可以读出序列了. ; 假如有一个DNA, 互补序列是GATCCGAT, 我们试着做一下:; 制得的四组混合物全部平行地点加在变性聚丙烯酸受凝胶电泳板上进行电泳，每组制品中的各个组分将按其链长的不同得到分离，从而制得相应的放射性自显影图谱。从所得图谱即可直接读得DNA的碱基序列。 ;制备单链模板