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第 一 章 蛋 白 质 的 结 构 与 功 能 1．为何蛋白质的含氮量能表示蛋白质相对量？实验中又是如何依此原理计算蛋白质含量的？ 各种蛋白质的含氮量颇为接近，平均为 16％，因此测定蛋白质的含氮量就可推算出蛋白质含量。 常用 的公式为：蛋白质含量（克％） =每克样品含氮克数 X 6 ．25 X 100 。 2．何谓肽键和肽链及蛋白质的一级结构？ 一个氨基酸的 a- 羧基和另一个氨基酸的 a- 氨基，进行脱水缩合反应， 生成的酰胺键称为肽键。 肽键具 有双键性质。由许多氨基酸通过肽键相连而形成长链，称为肽链。肽链有二端，游离 a- 氨基的一端称 为 N- 末端，游离 a- 羧基的一端称为 C- 末端。蛋白质一级结构是指多肽链中氨基酸排列顺序，它的主 要化学键为肽键。 3．什么是蛋白质的二级结构？它主要有哪几种？各有何结构特征？ 蛋白质二级结构是指多肽链主链原子的局部空间排布，不包括侧链的构象。它主要有α -螺旋、β -折 叠、β -转角和无规卷曲四种。在α -螺旋结构中，多肽链主链围绕中心轴以右手螺旋方式旋转上升， 每隔 3．6 个氨基酸残基上升一圈。 氨基酸残基的侧链伸向螺旋外侧。 每个氨基酸残基的亚氨基上的氢 与第四个氨基酸残基羰基上的氧形成氢键，以维持α - 螺旋稳定。在β -折叠结构中，多肽键的肽键平 面折叠成锯齿状结构，侧链交错位于锯齿状结构的上下方。两条以上肽键或一条肽键内的若干肽段平 行排列， 通过链间羰基氧和亚氨基氢形成氢键， 维持β -折叠构象稳定。 在球状蛋白质分子中， 肽链主 链常出现 1800回折，回折部分称为β -转角。β -转角通常有 4个氨基酸残基组成，第二个残基常为脯 氨酸。无规卷曲是指肽链中没有确定规律的结构。 4．举例说明蛋白质的四级结构。 蛋白质四级结构是指蛋白质分子中具有完整三级结构的各亚基在空间排布的相对位置。 例如血红蛋白， 它是由 1个α亚基和 1个β- 亚基组成一个单体， 二个单体呈对角排列， 形成特定的空间位置关系。 四 个亚基间共有 8 个非共价键，维系其四级结构的稳定性。 5．举例说明蛋白质的变构效应。 当配体与蛋白质亚基结合， 引起亚基构象变化， 从而改变蛋白质的生物活性， 此种现象称为变构效应。 变构效应也可发生于亚基之间，即当一个亚基构象的改变引起相邻的另一亚基的构象和功能的变化。 例如一个氧分子与 Hb 分子中一个亚基结合， 导致其构象变化， 进一步影响第二个亚基的构象变化， 使 之更易与氧分子结合，依次使四个亚基均发生构象改变而与氧分子结合，起到运输氧的作用。 6．常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的作用原理是什么？ 蛋白质分离纯化的方法主要有：盐析、透析、超离心、电泳、离子交换层析、分子筛层析等方法。盐 析是应用中性盐加入蛋白质溶液，破坏蛋白质的水化膜，使蛋白质聚集而沉淀。透析方法是利用仅能 通透小分子化合物的半透膜，使大分子蛋白质和小分子化合物分离，达到浓缩蛋白质或去除盐类小分 子的目的。蛋白质为胶体颗粒，在离心力作用下，可沉降。由于蛋白质其密度与形态各不相同，可以 应用超离心法将各种不同密度的蛋白质加以分离。 蛋白质在一定的 pH溶液中可带有电荷， 成为带电颗 粒，在电场中向相反的电极方向泳动。由于蛋白质的质量和电荷量不同，其在电场中的泳动速率也不 同，从而将蛋白质分离成泳动速率快慢不等的条带。 蛋白质是两性电解质， 在一定的 pH溶液中， 可解 离成带电荷的胶体颗粒， 可与层析柱内离子交换树脂颗粒表面的相反电荷相吸引， 然后用盐溶液洗脱， 带电量小的蛋白质先被洗脱，随着盐浓度增加，带电量多的也被洗脱，分部收集洗脱蛋白质溶液，达 到分离蛋白质的目的。分子筛是根据蛋白质颗粒大小而进行分离的一种方法。层析柱内填充着带有小 孔的颗粒，小分子蛋白质进入颗粒，而大分子蛋白则不能，因此不同分子量蛋白质在层折柱内的滞留 时间不同，流出层析柱的先后不同，可将蛋白质按分子量大小而分离。 种氨基酸具有共同或特异的理化性质 氨基酸具有两性解离的性质 含共轭双键的氨基酸具有紫外吸收性质 最大吸收峰在 280 nm 附近 氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物 氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物 8 什么是蛋白质的三级结构？ 在二级结构基础上多肽链进一步折叠形成蛋白质三级结构 三级结构是指整条肽链中全部氨基酸残基的 相对空间位置 疏水键、离子键、氢键和 Van der Waals 力等 第二章 核酸的结构与功能 1. 细胞内有哪几类主要的 RNA？其主要功能是什么？ 动物细胞内主要含有的 RNA种类及功能 细胞核和胞液 线粒体 功能 核糖体 RNA rRNA mt rRNA 核糖体组成成分 信使 RNA mRNA mt mRNA 蛋白质合成模板 转运 RNA tRNA mt tRNA