bradford法测定蛋白的浓度.docx

1 / 2 1 / 2 2/ 2 2/ 2 Bradford法测定蛋白质的浓度 原理 Bradford测定蛋白质浓度的方法和考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度一样，是 利用蛋白质-染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速灵敏的方法。 该法是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一 Bradford法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。 利用此方法检测速度极快，10?20个样品只需不足10分钟即可完成。 灵敏度高，检测浓度下限达到25ug/ml,最小检测蛋白量达到 0.5ug待测样品体积为1?20ul。 且在50?1000 ug/ml浓度范围内有较好的线性关系。 Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品 中-巯基乙醇的浓度可咼达1M，二硫苏糖醇的浓度可咼达 5mM。但受略咼浓度 的去垢剂影响。需确保SDS氐于 0.01%, Triton X-100低于 0.05%, Tween 20, 60, 80低于 0.015%。 试剂和仪器 一、试齐I」 试剂盒自备： G250染色液、BSA标准蛋白。 BSA标准蛋白浓度已稀释至500卩g/ml -20C保存。二、测试样品 待测样品蛋白浓度稀释在50-500 g/ml范围内为宜。 三、仪器 96 孔酶标、酶标仪。 操作方法 标准品编号 500ug/mlBSA/ 口1 蒸馏水/卩110302 1.5 28.45 12 186 6830 0分别于小离心管中混匀后，取 20卩加入到对应酶标孔中待测样品编号 31415?…待测样品稀释后，各取20卩加入到相应酶标孔中G250/卩1200孔1/ 反应 3-5min 用酶标仪测定 A595nm 处的吸光值。 根据标准曲线计算待测样品的蛋白浓度。