深入细胞生物学综合性实验.pptVIP

试剂2 50%硝酸银溶液 氨银溶液： 4g硝酸银溶于5ml蒸馏水，再加入5ml浓氨水 3%甲醛溶液：3ml36%甲醛液，加蒸馏水97ml，用4g无水醋酸钠调节pH7，4℃保存。使用前用甲酸调pH4.5 动物染色体制备方法和步骤 秋水仙素处理 实验前3~4h，按动物每克体重2~4μg的剂量，腹腔注射秋水仙素 收集骨髓细胞 处死动物后，立即取出股骨，用刀片剔掉肌肉，切开股骨两端，用吸有生理盐水的注射器插入股骨的上端，冲出骨髓细胞至离心管中，直至股骨变白色为止。 将收集的骨髓细胞于1000rpm离心10min 动物染色体制备方法和步骤 低渗处理 离心后加入600ul蒸馏水，用吸管轻轻吹打成细胞悬液，置37℃低渗20min 固定 沿管壁逐滴加入固定液600ul，吹打成悬液，室温固定20min，离心。重复此操作一次。最后用500ul固定液将沉淀悬浮。 动物染色体制备方法和步骤 滴片 用镊子取预先冰冻的干净载玻片，迅速滴上2~3滴细胞悬液，立即用嘴向同一方向吹气，使细胞分散均匀，然后置酒精灯上微微加热干燥 Giemsa染液染色30min，镜检 注意事项 低渗处理是实验成败的关键 处理和操作过程中注意要有利于细胞完整和染色体的伸展、分散 作业 绘出骨髓细胞分裂中期染色体核型图 指出染色体数目（2n） NOR的显示实验步骤 快速银染法(可选）： 在染色体标本上滴加含1%甲酸的2%明胶水